布鲁菌外膜蛋白16纯化方法的改进

2013-09-21张建坡王相国靳亚平王爱华

动物医学进展 2013年12期

关键词：方法

杨磊，张建坡，王相国，许勤，靳亚平，王爱华

（西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌712100）

蛋白重组技术在传染病的诊断以及作为亚单位疫苗方面有着广泛的应用。高水平的重组蛋白表达是蛋白提纯以及其他应用的先决条件。高产量和高纯度的融合表达蛋白在生物化学、三维结构、免疫反应性和诊疗研究中有着广泛而重要的意义［1］。纯化的重组蛋白被用于多种传染性疾病包括布鲁菌病的诊断方法的研究。布鲁菌病（Brucellosis）是由布鲁菌（Brucella）感染引起的世界范围的重要人畜共患传染病之一，在我国属于二类传染病［2］。布鲁菌是革兰阴性、兼性细胞内寄生菌，主要通过黏膜上皮侵入机体，在脾脏、肝脏、乳腺、生殖器官等部位增殖和扩散［3］。人类通过食用被感染动物的产品或直接接触被感染动物而感染布鲁菌病。布鲁菌外膜蛋白（outer membrane protein，Omp）暴露于细菌表面，在布鲁菌不同种之间具有高度的保守性，动物感染后可以产生针对不同蛋白的特异性抗体，引起免疫性保护反应［4］，布鲁菌外膜蛋白16（Omp16）属于第一组外膜蛋白，是一种免疫优势抗原和探测抗布鲁菌抗体的重要靶分子，几乎存在于所有已知的布鲁菌种型中［5－7］。因此用布鲁菌Omp16作为临床血清学方法的检测是非常可靠的，而这种方法的建立需要大量的布鲁菌外膜重组蛋白Omp16。为了获得布鲁菌外膜重组蛋白Omp16，本研究将其连接于PET32－a原核表达载体，进一步改良提纯方法，最终提高了Omp16产量和纯度。