陈志胜，黄晓敏，廖敬森

（佛山科学技术学院，广东佛山528000）

慢病毒载体是一种新型转基因载体，以其独特的优势成为转基因研究和基因治疗中病毒载体的研究热点。作为外源基因载体，已广泛地用于体外细胞的转染、转基因研究，以及结合RNAi进行功能基因组和基因治疗研究［1－2］。近几年来，利用慢病毒为载体对家禽细胞转基因的操作也进行了一些尝试，但还远没有达到哺乳动物的研究水平。Hen G等［3］研究表明，慢病毒可以携带外源基因至受体鸡胚中表达，但是表达效率极低，仅为0.48%。Chapman S C等［4］用慢病毒载体生产转基因鸡，其种系传递率均明显低于相同载体在小鼠中的报道。本研究将4种已构建好的慢病毒质粒pLP1、pLP2、p－VSVG和pll3.7以脂质体介导转染到293T细胞中，将其包装成以VSV－G为囊膜糖蛋白的复制缺陷型假逆转录病毒，再用这种包装产物感染体外培养的鸡胚和鸭胚成纤维细胞，通过绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）基因作为标记基因，观察其荧光表达，并检测其感染效率，从而为重组慢病毒系统在家禽细胞上的合理使用提供理论和试验基础，进一步为慢病毒介导法制备转基因家禽的研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

4种基于HIV－1的复制缺陷型慢病毒4种质粒系统pLP1、pLP2、p－VSVG、pll3.7以及293T细胞均由中山大学发育生物学与发育工程研究室惠赠。大肠埃希菌DH5α由本试验室保存。鸡、鸭胚成纤维细胞为原代培养：取8日龄～10日龄的鸡、鸭胚，去除头部、四肢、内脏及可见的血管，用2.5g／L的胰蛋白酶－0.2g／L的EDTA 消化液，置于37℃消化10min，得到的细胞用含100mL／L胎牛血清的DMEM培养液置37℃、饱和湿度、体积分数为5%的CO2培养箱培养。……