安 阳 邱宝安 赵文超

解放军海军总医院肝胆外科，北京 100048

浸润和转移是胆管癌病变进展中的重要生物学行为，也是患者死亡的重要原因。Kiss-1和上皮黏附素（E-cadherin）高表达对细胞的恶变及转移有抑制作用[1]。TWIST能通过抑制E-cadherin的表达来调节肿瘤细胞上皮-间质转化，从而促进肿瘤浸润和转移[2]。本实验应用免疫组织化学技术检测胆管癌中TWIST、Kiss-1和E-cadherin的表达情况，探讨TWIST、Kiss-1和E-cadherin与胆管癌临床病理特征的关系，旨在为揭示肿瘤的发生发展提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

选择胆管癌根治术切除后留取的蜡块组织109例作为观察组，均符合WHO中关于胆管癌的诊断标准，并由病理主治医师阅片再次确认。本组患者年龄为46～76岁，平均（55.4±2.5）岁，其中男 58例，女 51例，术前均未进行放化疗，同时选取病理证实为正常胆管黏膜组织70例作为对照组，年龄为 46～75 岁，平均（55.1±3.7）岁，其中男 35 例，女35例。两组在性别、年龄等一般资料上比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白表达的检测

TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白均购自武汉博士德生物工程有限公司，检测应用免疫组化SP法，应用二氨基联苯胺（DAB）显色，由病理科主管技师进行操作，并在显微镜下进行显色，严格质量控制，减少人为误差。

1.3 结果判定方法

结果的判断均由两位病理主治医师共同阅片得出。Kiss-1和E-cadherin阳性染色均位于细胞膜和细胞质，E-cadherin蛋白阳性染色位于细胞膜，呈棕黄色为阳性细胞，合并计算高倍镜下（400×）随机选择的10个视野中阳性细胞占全部计数肿瘤细胞的百分率，平均每个视野呈阳性反应的细胞数≥10%为阳性，无明显阳性反应或阳性反应的细胞数＜10%为阴性。

1.4 统计学方法

数据应用SAS 6.12进行统计分析，两组间比较采用χ2检验，并进行线性相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白在胆管癌及正常胆管黏膜组织中的表达

TWIST在胆管癌组织中的阳性表达明显高于对照组，而Kiss-1和E-cadherin在胆管癌组织中的阳性表达明显低于对照组。见表1。

2.2 TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白的表达与胆管癌临床病理特征的关系

TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白在胆管癌不同分化程度、浸润深度及不同淋巴结转移中的表达差异有统计学意义，见表2。

2.3 胆管癌中TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白表达的相关性

应用SAS软件进行线性相关分析显示，观察组中TWIST和 Kiss-1（r=-0.45，P=0.0198）、TWIST 和 E-cadherin（r=-0.48，P=0.0095）的表达具有负相关性，而Kiss-1和 E-cadherin 的表达具有正相关性（r=0.44，P=0.0130）。

3 讨论

肿瘤进展过程中出现基因和蛋白表达的异常，其中抑癌基因的失活是导致肿瘤增殖失控性增生、浸润和远处转移的基础。TWIST基因是一种高度保守的碱性螺旋转录因子，最初在果蝇中发现，是HLH超家族的成员，参与机体的多种调节过程[3-4]。尤其是中胚层发育及形态形成过程及诱导细胞移动及组织塑形中起重要作用[5-6]。E-cadherin是钙依赖的黏附素家族的一个经典成员。在肿瘤的浸润生长和转移过程中，黏附起到重要作用。近年来，有关紧密连接蛋白及黏附分子功能的研究日趋增多，并证实了其在肿瘤发生发展中的重要作用[7]。Kiss-1是一种新发现的抑癌基因，也是应用微细胞介导技术在黑色素细胞株中提取并分离的，Kiss-1定位于染色体1q32，包括4个外显子，编码产生54个氨基酸。正常情况下Kiss-1在正常黏膜中高表达，对抑制肿瘤向周围组织浸润有重要作用，而当其表达下降时，Kiss-1对肿瘤增生及浸润的抑制作用下降，引发肿瘤恶性生长的生物学行为。

本实验通过免疫组织化学技术检测胆管癌中TWIST、Kiss-1和E-cadherin的表达，结果显示TWIST在胆管癌组织中高表达，Kiss-1和E-cadherin在胆管癌组织中低表达，提示三种蛋白均与胆管癌细胞的恶变有关。结果显示TWIST、Kiss-1和E-cadherin在不同分化、不同浸润深度、不同淋巴结转移患者中的表达有明显的差异，提示三种蛋白可能参与了肿瘤的进展，即TWIST、Kiss-1和E-cadherin异常表达后参与了肿瘤的分化过程及淋巴结转移过程，使肿瘤迁移能力增强。TWIST、Kiss-1和E-cadherin参与了肿瘤的分化，由于肿瘤的分化是肿瘤发生过程中最重要的阶段，也说明了TWIST、Kiss-1和E-cadherin对肿瘤的分化起核心作用。由于分化、浸润深度及淋巴结转移均与患者的预后相关，因此，三种蛋白可能与预后有一定关系。实验结果显示TWIST、Kiss-1和E-cadherin具有相关性，提示三种蛋白具有协同作用，即TWIST不仅具有调节以E-cadherin为主的黏附作用[8-9]，还具有调节Kiss-1的作用，使肿瘤的转移潜能增强[10]。恶性肿瘤侵袭和转移的先决条件是癌细胞脱离原发灶，而在此过程中起作用是的异常表达的E-cadherin[11-13]，当TWIST对其调节作用下降时，使肿瘤细胞间的黏附作用下降，肿瘤细胞易于离开原发灶，在远隔器官进行定植，形成转移癌[14-15]。在此过程中TWIST调节的Kiss-1也可以改变细胞外基质和基底膜的完整性。因此Kiss-1和E-cadherin的表达缺失以及TWIST的表达增加是促进肿瘤浸润和转移的重要因素，使肿瘤抑制基因与细胞外基质降解形成了一个协同的过程，共同参与肿瘤的发展。

总之，TWIST、Kiss-1和E-cadherin异常表达在胆管癌发生发展中起重要作用，三者具有协同效应，共同促进肿瘤的进展。

表1 TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白在胆管癌及正常胆管黏膜组织中的表达[n（%）]

表2 TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白的表达与胆管癌临床病理特征的关系[n（%）]

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