马 骁， 王 建， 田 徽， 罗凤娟， 黄 聪， 夏厚林

(成都中医药大学药学院，教育部重点实验室中药标准化实验室，四川成都611137)

远志为远志科植物远志Polygala tenuifolia Willd和卵叶远志 Polygala sibirica L．的干燥根。远志味苦、辛，性温，主归心肾经［1］，具有宁心安神、化痰开窍的功效，主治心神不宁证、癫痫惊狂及咳嗽痰多，为临床常用药。课题组的前期研究结果显示:单味远志具有抑制胃肠动力的副作用，同时对胃肠黏膜有一定损伤［2-3］。通过对厚朴配伍远志的研究发现:在远志中加入厚朴后，远志的胃肠动力障碍及对胃黏膜的损伤得到了有效的抑制，同时也保存了远志宁心安神、化痰开窍的功效，尤以远志与厚朴比例为1∶2时效果最佳［4］。

远志传统的炮制方法繁多，主要有净制、炒制、蜜炙、甘草炙、姜汁炙、酒制、麸制、朱砂制，对远志炮制品的药理、化学研究因此也更多集中在蜜炙、甘草炙、姜汁炙等方面。课题组结合厚朴配伍远志的研究结果，通过采用7因素3水平正交试验表，选取A(远志厚朴比例1∶1～1∶3)、B(厚朴煎汁时间5～15 min)、C(厚朴汁浓缩体积10～40 mL)、D(炒炙温度60～120℃)、E(炒炙时间6～12 min)、F(炙远志煎煮时间20～60 min)此6因素3水平为考察对象，结合胃残留肠推进实验，筛选出了厚朴汁炙远志的减毒增效的最佳工艺及煎煮方法，并通过镇静、自主活动、止咳、祛痰等相关药理实验研究，证明了优选出的炮制品药效稳定。同时，运用化学成分分析，初步考察了远志炮制品的指标性成分的变化。

1 仪器与试药

Shimazdu LC—20AT高效液相色谱仪，N2000色谱工作站，BP211D电子分析天平，GL-20G-Ⅱ冷冻离心机 (上海安亭科学仪器厂)，KQ—600 DE型数控超声波清洗器 (40 kHz，600 W，昆山市超声仪器有限公司)。甲醇为分析纯、色谱纯，水为乐百氏纯净水，其他试剂均为分析纯。

远志及厚朴药材均购于成都市西南药都中药材市场，经成都中医药大学卢先明教授鉴定厚朴为厚朴Magnolia officinalis Rehd．et Wils．的根皮，远志为远志科远志Polygala tenuifolia willd的根，均为2010年版《中国药典》收载品种。经测定，远志药材中细叶远志皂苷含有量大于2.0%，厚朴药材中和厚朴酚及厚朴酚总量大于1.6%。符合《中国药典》要求。

和厚朴酚、厚朴酚与细叶远志皂苷对照品均购自成都曼斯特生物科技有限公司，批号MUST-11050601、MUST-11050602、 MUST-11042801， 经面积归一化法计算，纯度均大于98.0%，可做对照品使用。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 ①测定和厚朴酚及厚朴酚为Boston Green C18色谱柱 (4.6 mm×250 mm，5μm);甲醇-水 (78 ∶22)为流动相;体积流量 1 mL/min;柱温30℃;检测波长为294 nm。分离度均大于1.5，理论塔板数按厚朴酚峰计算不低于3 800。②测定细叶远志皂苷为Boston Green C18色谱柱 (4.6 mm×250 mm，5μm);甲醇-0.05%磷酸溶液 (55∶45)为流动相;体积流量1 mL/min;柱温30℃;检测波长为210nm。分离度大于1.5，理论塔板数按细叶远志皂苷峰计算不低于3 000。对照品及样品HPLC图谱见图1、图2。

图1 和厚朴酚、厚朴酚对照品和药液样品HPLC图Fig.1 HPLC chromatogram s of honokiol，magnolol standards and samples

图2 细叶远志皂苷对照品和药液样品HPLC图Fig.2 HPLC chromatogram s of tenuifolin standard and samples

2.2 炮制品、单味远志、单味厚朴药液的制备①炮制品药液:依据正交设计优选出能降低胃肠动力障碍，又能保存镇静、祛痰镇咳功效的炮制品。将远志炮制品中加10倍量水浸泡30 min后，武火煮沸，文火煎煮20 min。将药液减压浓缩至50 mL，定容至100 mL，浓缩为含生药为1.5 g/mL的药液。②远志药液:10倍量水浸泡50 g远志生药材30 min，武火煮沸，文火煎煮20 min。将药液减压浓缩至50 mL，定容至100 mL，浓缩为含生药为0.5 g/mL的药液。③厚朴药液:10倍量水浸泡100 g厚朴生药材30 min，武火煮沸，文火煎煮10 min。将药液减压浓缩至50 mL，定容至100 mL，浓缩为含生药为1.0 g/mL的药液。

2.3 测定酚性物质的供试品的制备 取精密量取远志药液、厚朴药液、炮制品药液各2 mL，加甲醇定容至10 mL量瓶中，振摇，过0.45μm微孔滤膜，即得。

2.4 测定细叶远志皂苷的供试品的制备 吸取经过静置的厚朴药液、远志药液、炮制品各上清液，3 000 r/min离心10 min后，精密量取各离心后药液5 mL，加入质量浓度为0.11 g/mL的氢氧化钠溶液50 mL，配制成质量浓度为0.10 g/mL氢氧化钠溶液55 mL，加热回流2 h，放冷，用盐酸调节pH值为4～5，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次50 mL，合并正丁醇液，回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得。

2.5 对照品的制备 ①取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，精密称定，加甲醇混合制成每1 mL含厚朴酚40μg、和厚朴酚24μg的溶液，即得。②取细叶远志皂苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，即得。

2.6 阴性干扰试验 取2.3项下远志供试品10 μL，依照2.1项下①的色谱条件进样，检测，未发现干扰。取2.4项下厚朴供试品10μL，依照2.1项下②的色谱条件进样，检测，未发现干扰。

2.7 线性关系考察 精密吸取2.5项下①对照品2、4、6、8、10、12、18μL及质量浓度为每1 mL含和厚朴酚48μg、厚朴酚80μg的混合对照品10 μL进样，测定;精密吸取2.5项下②细叶远志皂苷对照品 2、4、6、8、10、12、16μL进样，测定。记录峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，对照品进样量 (μg)为横坐标，计算标准曲线回归方程，见表1。

表1 和厚朴酚、厚朴酚及细叶远志皂苷线性关系和范围Tab.1 Linearities and ranges of honokiol，magnolol and tenuifolin

2.8 精密度试验 精密吸取2.5项下和厚朴酚、厚朴酚混合对照品、细叶远志皂苷对照品10μL，分别按照2.1项下色谱条件，连续进样6次，记录峰面积。和厚朴酚、厚朴酚、细叶远志皂苷峰面积RSD分别为1.20%、0.86%、1.24%，表明仪器精密度良好。

2.9 重复性试验 按照2.3项下供试品制备方法，平行制备6份厚朴供试品，按2.1项下①色谱条件，进样10μL。测得厚朴药液中和厚朴酚、厚朴酚峰面积的RSD分别为2.89%、2.22%;按照2.4项下供试品制备方法，平行制备6份远志供试品，按2.1项下②色谱条件，进样10μL。测得远志药液中细叶远志皂苷峰面积的RSD为2.44%。表明分析厚朴、远志药液中指标成分的方法重复性良好。

2.10 稳定性试验 分别精密吸取2.3项下厚朴供试品，2.4项下远志供试品，2.5项下和厚朴酚、厚朴酚混合对照品及细叶远志皂苷对照品，按照2.1项下色谱条件分别于0、2、4、8、12、24 h进样10μL。测得厚朴供试品中和厚朴酚、厚朴酚的峰面积RSD分别为0.36%、1.56%，和厚朴酚及厚朴酚混合对照品中和厚朴酚、厚朴酚的峰面积RSD分别为1.58%、1.62%;测得远志供试品、细叶远志皂苷对照品中细叶远志皂苷的峰面积RSD分别为0.76%、1.32%。表明在室温条件下，供试品、对照品溶液在24 h内稳定。

2.11 加样回收率试验 平行精密量取6份厚朴水煎液2 mL，加入和厚朴酚及厚朴酚混合对照品适量，按2.3项下供试品制备方法制备，按照2.1项下色谱条件①进样10μL。计算各对照品的平均加样回收率及RSD，见表2。和厚朴酚、厚朴酚平均回收率在96.70%～100.52%，RSD均小于2%。

平行精密量取6份远志水煎液5 mL，加入细叶远志皂苷对照品适量，按照2.4项下供试品制备方法制备，按照2.1项下色谱条件②进样10μL。计算各对照品的平均加样回收率及RSD，见表2。细叶远志皂苷平均回收率为101.88%，RSD为2.79%。

2.12 样品测定 取2.3、2.4项下各供试品，分别按照2.1项下色谱条件进行测定，进样10μL，测定峰面积，计算和厚朴酚、厚朴酚及细叶远志皂苷量，结果见表3。

3 讨论

远志能安神益智、祛痰开窍、消散痈肿，同时也有“令人闷”胃肠道副反应。厚朴作为行气消胀要药，其功效燥湿行气、化痰平喘，对于胃肠气滞、胀满有确切的疗效，现代研究发现厚朴也有一定的中枢镇静作用。前期研究发现，两者配伍既可以降低远志的不良反应，又可以增强远志的功效，尤以远志与厚朴比例为1∶2时，效果最佳。但此种配伍鲜有，因此这个配伍方式较难以影响临床医生应用非常规的此种药对。将厚朴炙远志做成饮片之后，能更直接的便于医生及患者接受，可以更好的服务于临床。

表2 和厚朴酚、厚朴酚、细叶远志皂苷的加样回收率(n=6)Tab.2 Results of recovery tests of honokiol，magnolol and tenuifolin(n=6)

表3 样品测定结果 (n=3)Tab.3 Determination results of decoction samples(n=3)

本实验基于2010年版《中国药典》厚朴药材、远志药材定量测量的制备方法及色谱条件，通过改进，确立了可靠的定量测定方法，检测了各药液中和厚朴酚、厚朴酚及细叶远志皂苷的量。远志总皂苷为远志发挥药效的有效部位，同时也是造成远志胃肠动力障碍的物质基础［5］。其在碱水解的情况下，能全部转化为细叶远志皂苷［6］。细叶远志皂苷作为衡量远志的指标性成分，旨在反映远志中有效部位总皂苷的量。和厚朴酚及厚朴酚作为厚朴的活性成分，具有广泛的药理作用，是厚朴的有效成分和指标性成分［7-8］。

本课题组前期药理实验已筛选出能减毒增效的厚朴汁炙远志炮制品。研究结果显示，炮制品的酚性成分与平行考察的单味厚朴药液比较，酚性物质略有降低;而炮制品的细叶远志皂苷与单味远志药液比较略有升高，但均无显著差异。提示炮制品对厚朴、远志的指标性成分无明显干预，其指标性成分均得以保留。这与课题组前期开展的体外实验研究所得结果相符合［9］。炮制品中厚朴酚性的量略有降低，可能与厚朴汁液浓缩、炒炙等炮制过程中所产生的损耗有关。炮制品中细叶远志皂苷的量略有升高，也许与厚朴炙炒制过程增加其溶出有关。体外实验初步提示，厚朴汁炙远志后指标性成分略有变化，但不显著，表明炮制对有效部位干预不显著，并使其得以保留。

本实验仅仅考查了炮制对指标性成分的影响，而炮制对两味药所含的其他化学成分有无影响，指标性成分之间的构成比怎样，有待采用指纹图谱或液汁联用等技术加以阐释。再者，药物拥有的物质基础 (所含化学成分)，必须作用于生物机体后才能产生效应。生物机体极其复杂，要阐明厚朴汁炙远志的物质基础变化规律，单凭指标成分定量测定远远不够。故要揭示炮制后对厚朴与远志所含指标性成分的影响，尚需结合药代动力学研究技术开展深入研究。

［1］国家药典委员会．中华人民共和国药典:2010年版一部［S］．北京:中国医药科技出版社，2010:146．

［2］王 建，郭 娟，武 云．远志不同炮制品对胃肠运动及消化功能的影响［J］．中药药理与临床，2006，22(3/4):120-122．

［3］王 建，郭 娟，武 云．生远志与各炮制品的急性毒性及对胃黏膜损伤研究［J］．中国医学研究与临床，2005，3(2):5-6．

［4］江 娟．厚朴缓解远志胃肠不良反应的提取方法与配比研究［D］．成都:成都中医药大学，2009:62．

［5］田 徽，武 云，王 建，等．生远志中总皂苷、生物碱、口山酮、脂肪油的急性毒性研究［J］．中药药理与临床，2005，21(4):50-51．

［6］董晓兵，李 军，姜 勇，等．测定天王补心丸和归脾丸中细叶远志皂苷的含量［J］．中国中药杂志，2007，32(16):1647-1649．

［7］刘可云，董 志，朱 毅．厚朴酚与和厚朴酚的药理学研究现状［J］．中药药理与临床，2006，28(5):716-717．

［8］肖兰贵，张荣利．厚朴的药效药理［J］．中医药动态，1995(3):23-24．

［9］李 达．远志与厚朴配伍前后化学成分对比及“减副”机制初步研究［D］．成都:成都中医药大学，2009:41．