李 阳 孙世光 谢予朋 孙晓迪 闫 荟 石亚飞

1.北京军区总医院药剂科，北京 100700；2.河北北方学院研究生部，河北张家口 075000

徐长卿为萝藦科多年生草本植物，《太平圣惠方》记载，徐长卿具有化瘀散结，降脂通络等作用[1]。临床上用于调节血脂代谢紊乱，降低血脂、防治心脑血管动脉硬化[2]。攻膜复合物C5b-9的过度活化引发的内皮细胞损伤是导致动脉粥样硬化发生的主要原因[3]，前期实验研究已确定了导致内皮细胞损伤的C5b-9临界浓度，即C5b-9的亚溶破剂量，本文旨在研究徐长卿提取物对损伤内皮细胞中炎症介质活性的调节作用，探究徐长卿治疗动脉粥样硬化的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

HUVEC（上海青忠贸易有限公司），胰蛋白酶（Amresco公司），RPMI1640 培养基（Hyclone公司），补体 C5b-6、C8、C9（德国 Merck 公司），补体 C7（美国 Sigma公司），乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）试剂盒、白细胞介素-8（IL-8）试剂盒（南京建成），徐长卿药材（购自吉林大药房），丹皮酚标准品（北京药品生物制品检定所），标准酶标仪（美国Thermo公司）。

1.2 方法

1.2.1 徐长卿药材有效成分提取 称取徐长卿药材适量，置于圆底烧瓶中，加入适量50%乙醇溶液，回流提取2 h，待提取液冷却后二次回流提取1 h，放冷过滤，经冷冻干燥后，得到药材冻干粉。

1.2.2 内皮细胞损伤模型的建立[4-7]前期应用激光共聚焦显微技术已确定了导致内皮细胞损伤的C5b-9的临界浓度，现将该浓度的C5b-9组装于内皮细胞表面，具体过程如下：用2.5 mg/L的胰蛋白酶消化分离细胞，预热无血清的RPMI 1640培养液洗涤细胞3次，1000 r/min，离心 5 min。 加入纯品 C5b-6（1.6 mg/L，1 mL）和 C7（10 mg/L，1 mL），置于 37℃孵育 1 h。RPMI 1640洗去未结合的补体成分，加入 C8（10 mg/L，1 mL）和C9（10 mg/L，1 mL），置于 37℃孵育 1.5 h。……