李 炜， 吴云生， 马久太， 刘 峰， 杨广德

(1.西安交通大学药学系，陕西西安 710061;2.步长制药科研部，陕西西安 712000)

疗癣卡西甫丸是具有维族特色的传统药物，由黄连、菝葜、白芝麻、欧菝葜根四味药制成，具有清除碱性异常黏液质，燥湿，止痒的功效，临床用于肌肤瘙痒，体癣，牛皮癣等［1-2］。目前尚未见其质量研究的报道，为有效控制本品质量，参考有关文献，对其质量标准进行了研究。根据处方中药材和辅料的成分及其理化性质，采用薄层色谱法对制剂中黄连、白芝麻、菝葜和欧菝葜进行定性鉴别，对黄连中有效成分盐酸小檗碱和盐酸巴马汀，采用高效液相色谱法进行定量测定。结果表明，TLC鉴别方法和HPLC测定方法简单、准确、重复性好，可作为该制剂的质量控制方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 SSI高效液相色谱仪 (UV/VIS 400型紫外检测器;P4000泵;HW—2000色谱工作站);BP210D电子天平 (德国赛多利斯);AS3120超声波清洗器 (天津奥特赛斯仪器有限公司)。

1.2 试药 盐酸小檗碱对照品 (批号110713-200911，按含C20H18ClNO4为86.8%计);黄连对照药材 (批号120913-200407);芝麻素对照品(批号110836-200103);β-谷甾醇对照品 (批号110851-200504);薯蓣皂苷元对照品 (批号111539-200001);盐酸巴马汀对照品 (批号110732-200907，按含 C21H22ClNO4为 86.1%计)。以上对照品和对照药材均购自中国药品生物制品检定所。乙腈为HPLC级 (美国TEDIA公司)，水为超纯水，其余试剂均为分析纯 (西安化学试剂厂)。疗癣卡西甫丸 (陕西步长制药有限公司生产;批号为20091001、20091002、20091003;每袋装10 g)。

2 鉴别

2.1 黄连的薄层色谱鉴别［1，3］取研细后的本品约5 g，加甲醇15 mL，超声提取20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL溶解，作为供试品溶液。取除去黄连的阴性制剂，同法制成阴性对照溶液。另取黄连对照药材1 g，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液;再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述4种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨水 (6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂 (一侧槽中加入展开剂，另一槽中加入等体积的浓氨试液，预平衡15 min)，展开，取出，晾干，置紫外光灯 (365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，缺黄连的阴性对照无干扰，见图1。

图1 黄连的TLC图谱Fig.1 TLC chromatogram of Coptidis Rhizoma

2.2 菝葜和欧菝葜根的薄层色谱鉴别［3-6］取研细后的本品约15 g，加甲醇50 mL，超声提取30 min，滤过，滤液加盐酸6 mL，加热回流水解1 h，放凉，用石油醚 (60～90℃)萃取2次 (25 mL，20 mL)，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇1 mL溶解，作为供试品溶液。取除去菝葜和欧菝葜根的阴性制剂，同法制成阴性对照溶液。另取薯蓣皂苷元对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，缺菝葜和欧菝葜根的阴性对照无干扰，见图2。

2.3 白芝麻的薄层色谱鉴别［1，7-9］取研细后的本品约1 g，加正己烷15 mL，超声处理20 min，滤过，滤液浓缩至适量，加约2 g中性氧化铝，搅拌均匀，挥干溶剂，置中性氧化铝柱 (100～200目，柱高3 cm，内径1.5 cm)上，用三氯甲烷洗脱，收集第20～40 mL的洗脱液，浓缩至1 mL，作为供试品溶液。取除去白芝麻的阴性制剂，同法制成阴性对照溶液。另取芝麻素对照品及β-谷甾醇对照品，加三氯甲烷分别制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述4种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，缺白芝麻的阴性对照无干扰，见图3。

图2 菝葜和欧菝葜根的TLC图谱Fig.2 TLC chromatogram of Smilacis chinae Rhizoma and Sarsaparillae Radix

图3 白芝麻的TLC图谱Fig.3 TLC chromatogram of white sesame seeds

3 HPLC 测定［3，10-11］

3.1 色谱条件 Luna ODS色谱柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm);乙腈－0.1%磷酸溶液 (40∶60，每100 mL含十二烷基硫酸钠0.1 g)为流动相;柱温为30℃;检测波长为265 nm;体积流量为1 mL/min;进样量10 μL;理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4 000。见图4。

图4 疗癣卡西甫丸HPLC图Fig.4 HPLC chromatograms of Liaoxuan Kaxifu Pills

3.2 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱和盐酸巴马汀对照品适量，分别加甲醇制成每1 mL分别含盐酸小檗碱0.03 mg和盐酸巴马汀0.01 mg的溶液，作为对照品溶液。

3.3 供试品溶液的制备 取装量差异检查项下的本品，研细，取约1.2 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加盐酸-甲醇 (1∶100)的混合溶液25 mL，称定质量，60℃水浴中加热15 min，取出，超声提取30 min，室温放置过夜，再称定质量，用盐酸-甲醇 (1∶100)的混合溶液补足减失质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2 mL置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过 (0.45 μm)，即得。

3.4 线性关系的考察 分别取盐酸小檗碱对照品溶液 (0.281 6 mg/mL)和盐酸巴马汀对照品溶液(0.083 1 mg/mL)1、2、3、4、5 mL依次置 25 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，按上述色谱条件进样，以进样量为横坐标 (X)，峰面积为纵坐标 (Y)，绘制标准曲线。结果表明，盐酸小檗碱和盐酸巴马汀回归方程和相关系数分别为Y=162 983X－1 368.5，r=0.999 2;Y=148 357X+331.9，r=0.999 5。盐酸小檗碱在 0.112 6～0.563 2 μg范围内、盐酸巴马汀在 0.033 24～0.166 2 μg范围内进样量与峰面积线性关系良好。

3.5 精密度试验 取供试品溶液，按上述色谱条件测定，连续进样5次，测定峰面积，以盐酸小檗碱峰面积计算RSD为1.02%，以盐酸巴马汀峰面积计算RSD为1.21%。

3.6 稳定性试验 取供试品溶液分别在0、2、4、6、8 h进样，测定峰面积，计算得盐酸小檗碱RSD为1.68%，盐酸巴马汀RSD为1.56%，表明供试品溶液在8 h内稳定。

3.7 专属性试验 按处方比例制备缺黄连的阴性对照溶液，照上述色谱条件测定，结果阴性对照在相应的保留时间处无色谱峰，表明其他组分对测定无干扰，见图4。

3.8 重复性试验 取同一批制剂 (20091001)，按上述供试品溶液制备方法分别制备6份溶液，在上述色谱条件下测定盐酸小檗碱和盐酸巴马汀，盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的 RSD分别为1.98%、1.88%。

3.9 回收率试验 称取已知量的供试品约0.5 g(20091001)，共6份，分别加入一定量盐酸小檗碱对照品和盐酸巴马汀对照品，按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，测定盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的量。盐酸小檗碱平均回收率为97.6%，RSD为1.55%;盐酸巴马汀平均回收率为96.8%，RSD为1.92%。

3.10 样品测定 按上述色谱条件测定3批制剂中盐酸小檗碱和盐酸巴马汀量，结果盐酸小檗碱含有量分别为28.4、31.1和30.6 mg/袋;盐酸巴马汀含有量分别为8.42、9.16和8.6 mg/袋。

4 讨论

［1］方法鉴别制剂中芝麻素、β-谷甾醇，结果芝麻素斑点易受其它成分干扰，重复性差，难于判定。研究采用中性氧化铝柱除杂的方法，可基本消除背景色及临近点对芝麻素鉴别的影响，重复性好。根据文献报道，菝葜中也含有β-谷甾醇［4］，但采用本鉴别方法缺白芝麻的阴性制剂在对应位置无干扰，分析可能是本品处方中白芝麻用量远大于菝葜用量，并且白芝麻中β-谷甾醇量较菝葜中高。

曾比较了甲醇-水-磷酸、乙腈-磷酸二氢钠溶液等系统［12-14］，结果以乙腈－0.1%磷酸溶液 (40∶60，每100 mL含十二烷基硫酸钠0.1 g)的分离效果最好。在此色谱条件下，盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和其他组分均能达到基线分离。

处方中菝葜和欧菝葜根药材来源为同属植物，均含有菝葜皂苷类成分［4，15］，实验过程中也发现缺菝葜的空白制剂也可检出薯蓣皂苷元，故暂把薯蓣皂苷元做为菝葜和欧菝葜根的鉴别，专属性更强的鉴别方法有待于进一步研究。

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