刘晓哲

(河南省南阳市食品药品检验所，河南南阳 473059)

香砂六君丸收载于《中国药典》2010年版一部［1］，处方来源于《重订通俗伤寒论》，由木香、砂仁、党参、白术 (炒)等十味药组成，具有益气健脾、和胃的功效。临床上用于脾虚气滞、消化不良、嗳气食少、脘腹胀满、大便溏泄等症。方中君药木香的功效与活性成分木香烃内酯和去氢木香内酯有关，具有行气止痛、健脾消食的功效。目前该制剂的质量标准含量测定项仅测定了橙皮苷的量，参考相关报道，增加了对其木香 (君药)的有效成分木香烃内酯［2-5］和去氢木香内酯［6-8］的定量测定，以便更好地控制药品的质量。本实验利用同一流动相系统，同时测定香砂六君丸中木香烃内酯、去氢木香内酯及橙皮苷［9-12］的量。通过方法学验证，该方法操作简便、准确、重复性好，有利于更好地对香砂六君丸进行质量评价和监控。

1 仪器与试药

Agilent 1200液相色谱仪，配有1200系统 (四元泵、自动进样器、柱温箱、可变波长紫外检测器)，Agilent色谱化学工作站;Sartorious BP211D电子天平;WT—1200超声波清洗器 (济宁万通超声仪器设备厂)。

木香烃内酯 (供定量测定用、批号111524-200503)、去氢木香内酯 (供定量测定用、批号111525-200706)、橙皮苷 (供定量测定用、批号110721-200613)对照品均购自于中国药品生物制品检定所。

香 砂 六 君 丸 (批 号:100301、100302、100305、100308)及阴性对照样品均由河南省宛西制药股份有限公司提供。

乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 乙腈-水 (25∶75)为流动相，采用等度洗脱;Kromasil C18色谱柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm);柱温30℃;体积流量0.8 mL/min;检测波长为0～10 min，橙皮苷 (280 nm)，10～25 min，木香烃内酯、去氢木香内酯 (225 nm);进样量10 μL。色谱图见图1。

图1 对照品 (A)、阴性样品 (B)、供试品 (C)HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of reference substances(A)，negative sample(B)and sample(C)

2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取木香烃内酯、去氢木香内酯、橙皮苷对照品适量，置同一量瓶中，加甲醇配制成质量浓度分别为115.4、119.1、182.7 μg/mL的混合对照品贮备溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取供试品细粉0.403 6 g，置50 mL量瓶中，加甲醇约45 mL，摇匀，放置过夜，超声提取30 min，放冷至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，作为样品溶液。

2.4 阴性样品溶液的制备 取不加木香、陈皮的空白样品按照供试品溶液项下的方法，制成溶液，即得。

2.5 线性关系考察 精密量取木香烃内酯、去氢木香内酯、橙皮苷对照品贮备液1、2、5、10、25 mL置50 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成标准系列溶液。按照2.1项的色谱条件测定，分别进样10 μL，测得峰面积的积分值。以对照品质量浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。木香烃内酯回归方程为A=28.403C-5.818 3，相关系数r2=0.999 5，进样量在2.308～57.70 μg/mL范围内呈现良好线性;去氢木香内酯回归方程为A=21.536C-0.850 3，相关系数r2=0.999 6，进样量在2.382～59.55 μg/mL范围内呈现良好线性;橙皮苷回归方程为A=21.061C+8.806，相关系数r2=0.999 3，进样量在3.654～91.35 μg/mL范围内呈现良好线性。

2.6 稳定性试验 取同一香砂六君丸供试品溶液(批号100301)，按照2.1项下色谱条件，分别于0、2、4、6、8 h进样，测定峰面积值，计算得木香烃内酯RSD为1.52%、去氢木香内酯RSD为0.75%、橙皮苷RSD为1.45%，证明该溶液在8 h内稳定性良好。

2.7 精密度试验 取同一香砂六君丸供试品溶液(批号100301)，连续进样6次，测定峰面积，计算得木香烃内酯RSD为1.37%、去氢木香内酯RSD为0.89%、橙皮苷为1.12%，表明该方法精密度良好。

2.8 重复性试验 取同一批香砂六君丸 (批号100301)6份，按照供试品溶液制备项下方法平行制备6份供试品溶液，按照2.1项下色谱条件测定，将测得的木香烃内酯、去氢木香内酯、橙皮苷的峰面积分别代入2.5项下的回归方程计算。结果含木香烃内酯平均质量分数为0.897 mg/g，RSD为1.69%;去氢木香内酯平均质量分数为0.673 mg/g，RSD为1.03%;橙皮苷平均质量分数为7.603 mg/g，RSD为1.29%。表明该方法有较好的重复性。

2.9 加样回收试验 称取已知量的香砂六君丸(批号100301)6份，精密称取0.2 g(约相当于木香烃内酯0.179 mg;去氢木香内酯0.135 mg;橙皮苷1.52 mg)，分别置50 mL量瓶中，精密加入对照品溶液 (木香烃内酯、去氢木香内酯、橙皮苷分别为0.090 1、0.064 75、0.743 5 mg/mL)2 mL，加入甲醇45 mL，放置过夜，超声提取30 min，放冷至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，作为样品溶液。按照2.1项下色谱条件进行测定，将测得的木香烃内酯、去氢木香内酯、橙皮苷的峰面积分别代入2.5项下的回归方程计算。计算回收率，结果本法回收率良好，结果见表1～3。

表1 木香烃内酯的加样回收率试验结果Tab.1 Results of recovery test of costunolide

表2 去氢木香内酯的加样回收率试验结果Tab.2 Results of recovery test of dehydrocostus lactone

表3 橙皮苷的加样回收率试验结果Tab.3 Results of recovery test of hesperidin

2.10 样品的测定 取香砂六君丸3批，按2.3项下的制备方法制备样品溶液，按照2.1项下色谱条件测定，将测得的木香烃内酯、去氢木香内酯、橙皮苷的峰面积分别代入2.5项下的回归方程计算其含有量，结果见表4。

表4 香砂六君丸中有效成分的测定结果(n=3)Tab.4 Determination of active components in Xiangsha Liujun Pills(n=3)

3 讨论

3.1 提取方法的选择 使用加热回流1 h、3 h和冷浸过夜后超声提取30 min、60 min两种方法进行提取比较，结果显示两种提取方法效果无显著性差异。故选择冷浸过夜后超声30 min提取。

3.2 流动相的选择 分别采用乙腈－0.3%磷酸溶液 (20∶80)及乙腈－水 (25∶75)为流动相，结果分离效果均良好。因乙腈－水 (25∶75)简便易行，故选乙腈－水为流动相。

3.3 吸收波长的选择 用紫外分光光度计分别对对照品溶液进行200～300 nm波长范围的扫描，木香烃内酯、去氢木香内酯在225 nm处有最大吸收，橙皮苷在284 nm波长处有最大吸收。为了使被检测成分更好地检出，利用Agilent 1200紫外检测器可变波长功能，选择225 nm作为木香烃内酯和去氢木香内酯的检测波长，280 nm作为橙皮苷的检测波长。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:897-898.

［2］倪 琳，杨 锡.HPLC法同时测定达斯玛保丸中木香烃内酯、异土木香内酯和土木香内酯［J］.中成药，2012，34(4):664-667.

［3］项 菲.高效液相色谱法测定八味痛经片中木香烃内酯、去氢木香内酯和芍药苷［J］.中成药，2011，33(4):616-618.

［4］冯 欣，鲁晓光，罗布扎西，等.HPLC法同时测定藏药七味铁屑丸中木香烃内酯和去氢木香内酯［J］.中成药，2011，33(9):1535-1538.

［5］李 力，张振秋.不同炮制方法对木香中有效成分含量的影响［J］.华西药学杂志，2011，26(2):117-119.

［6］李 慧，陈宝田，翁立冬，等.木香炮制品中木香烃内酯和去氢木香内酯的 HPLC测定［J］.中草药，2007，38(11):64-66.

［7］谢秉湘，倪 赞.HPLC法测定肠康片中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量［J］.海峡药学，2010，22(9):49-50.

［8］赵小民，殷高彬.不同产地木香中木香烃内酯和去氢木香内酯的 HPLC测定［J］.安徽医药，2009，13(6):617-618.

［9］谢强胜，王 坤，尹宁宁.RP-HPLC法测定橘红丸中甘草苷、柚皮苷、橙皮苷和迷迭香酸［J］.中成药，2011，33(12):2085-2088.

［10］张寓云，毛素芳，郑奕辉，等.HPLC测定胃舒散中橙皮苷的含量［J］.中成药，2004，26(3):256-257.

［11］王海英，赵建泽.HPLC测定香砂养胃丸中橙皮苷的含量［J］.中成药，2005，27(9):1115-1116.

［12］王 娜，黄罗生，赵浩如.调神攻坚颗粒中橙皮苷和黄芩苷的含量测定［J］.江苏中医药，2008，40(10):88-89.