焦 慧，张 志，马清华，付 伟

1辽宁医学院附属第三医院 心内科，辽宁锦州 121001；2辽宁医学院附属第一医院 心内科，辽宁锦州 121001

细胞自噬是真核细胞中普遍存在的生命现象，低水平自噬对心肌细胞起保护作用，而高水平或持久的自噬则加重细胞损伤导致细胞死亡。如何适时有效地抑制自噬，减轻心肌损害，已成为心血管疾病的研究热点。Apelin是Tatemoto等[1]利用反向药理学方法从牛胃分泌物中提取并纯化的孤儿G蛋白偶联受体(血管紧张素1型受体相关蛋白APJ)的内源性配体，在体内广泛分布，尤其在心血管系统高度表达，具有降低血压、改善心脏功能、减小心肌缺血再灌注损伤[2]及抑制心肌细胞凋亡[3]等多种心肌保护作用。研究发现，Apelin亚型之一Apelin-13还具有抑制心肌细胞自噬的作用[4]，但其作用机制尚未得到证实。本研究通过葡萄糖剥夺建立体外乳鼠心肌细胞自噬模型，在细胞水平上观察Apelin-13对自噬的影响，进一步探讨其可能的作用机制。

材料和方法

1 主要试剂及药品 DMEM：F12(1∶1)培养基、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、PBS平衡盐溶液(Hyclone公司)；小牛血清(杭州四季青生物工程材料公司)；胰蛋白酶(Byotime公司)；Apelin-13(北京康肽生物科技有限公司)，Tricribine、抗磷酸酪氨酸抗体(美国Santa Cruz公司)，兔抗人β-actin抗体、兔抗人LC3抗体、兔抗人Akt抗体、兔抗人p-Akt(Ser473)抗体、兔抗人mTOR抗体及兔抗人p-mTOR(Ser2448)抗体(Cell Signaling Technology公司)。

2 心肌细胞的培养及鉴定 标本取自出生1~3 d的Sprague-Dawley(SD)乳鼠(辽宁医学院实验动物中心)，无菌条件下，取出生乳鼠的心脏，用PBS平衡盐溶液清洗3次后剪成1 mm3大小，用浓度为0.06%的胰蛋白酶于37℃恒温磁力搅拌器中分次消化，每次6~10 min至消化完全，小牛血清终止消化。……