赵洪涛，张 勇，赵春清，闫 威，高立学，李 威

1保定市第二医院，河北保定 071051；2解放军总医院，北京 100853

甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)是最常见的甲状腺恶性肿瘤，约占60%[1]，其颈部淋巴结转移率高，近年统计其发病率呈上升趋势[2]。探讨甲状腺癌的生物学行为及协助诊断、预测疗效的有关肿瘤标志物是一个研究热点。CD44v6是一种表面跨膜糖蛋白分子，主要参与细胞与细胞、细胞与基质之间的特异性粘连过程[3]，肿瘤细胞CD44v6出现使细胞表面黏附分子的构成和功能发生改变，使肿瘤细胞侵袭与转移的能力增强。Rasp21蛋白质为具有三磷酸鸟苷(guanosine triphosphate，GTP)酶活性的G蛋白，正常情况下存在量很少，当表达过多时致细胞生长分化失控，发生癌变。本文用免疫组化法研究CD44v6与Rasp21在甲状腺乳头状癌中的表达，探讨其与淋巴结转移的关系。

对象和方法

1 对象 收集2009-2011年保定市第二医院外科手术切除的甲状腺乳头状癌80例，其中男45例，女35例；年龄24~68(平均57.6)岁，55例有颈淋巴结转移。甲状腺腺瘤组织80例，男女各40例，年龄20~65(平均52.3)岁。以上病例术前均未经过治疗。

2 分组及阳性判断方法 依据人民卫生出版社第七版病理学规定，依据病理结果，分为甲状腺乳头状癌组和甲状腺腺瘤组。免疫组化采用SP法。所有标本均经10%甲醛固定，石蜡包埋，连续切片，分别作HE染色及SP免疫组化染色，SP染色法按照SP试剂盒说明书进行。每例用TBS代替第一抗体作阴性对照，用已知CD44v6和Rasp21阳性的组织作阳性对照。CD44v6阳性表达位于细胞膜呈棕黄色颗粒，阳性表达超过肿瘤细胞数10%定义为阳性，否则为阴性。Rasp21染色以细胞质出现棕黄色颗粒为阳性。CD44v6和Rasp21单克隆抗体及SP试剂盒购自福州迈新生物技术公司。

3 统计学处理 应用SPSS11.5统计软件，计数资料进行χ2检验，当n≥40，且某一个理论数1＜T≤5时，须对χ2进行连续性校正，避免假阳性结论。P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

甲状腺乳头状癌组的CD44v6与Rasp21阳性表达率显著高于甲状腺腺瘤组，甲状腺乳头状癌有淋巴结转移甲状腺乳头状癌组的CD44v6与Rasp21阳性表达率显著高于无淋巴结转移组(P＜0.05)，而CD44v6与Rasp21表达与年龄、性别、肿瘤大小无相关性(P＞0.05)。CD44v6和Rasp21在甲状腺乳头状腺癌中的表达均比甲状腺腺瘤组织高。CD44v6和Rasp21基因蛋白往往在同一病例中共同表达，有一定的协同性。见表1。

讨 论

细胞黏附分子CD44是一种整合膜糖蛋白，作为淋巴细胞的归巢受体和透明质酸酶的主要受体，能连结细胞基质中的层黏和纤维连结蛋白、Ⅰ型胶原和透明质酸分子，并与细胞管架蛋白相结合，参与细胞的伪足形成，而引起细胞形态和游动性改变，与细胞的迁移有关[4]，因此CD44能直接参与肿瘤的浸润、转移。CD44v6是CD44的一种变异型，其表达有助于肿瘤细胞获得转移潜能。CD44v6的促转移作用机理可能是表达CD44v6的肿瘤细胞与远隔的淋巴管和血管内某一受体结合，使转移至那里的肿瘤细胞更加稳定地寄宿和生长，形成转移瘤。本实验结果显示颈淋巴结转移的甲状腺乳头状癌的CD44v6阳性表达率显著高于无转移者，这提示甲状腺乳头状癌的淋巴结转移和CD44v6的阳性表达率相关，CD44v6具有促进甲状腺乳头状癌淋巴结转移的功能。陈文有[5]等报道80%的甲状腺腺瘤表达阴性，84.7%的乳头状癌阳性，本实验也予以证实。因此，CD44v6还可用于良、恶性甲状腺肿瘤的鉴别诊断。

Ras基因是第一个被鉴定的人类癌基因，Ras基因在人类恶性肿瘤发生、发展中的作用一直受到密切关注，与肿瘤相关的Ras原癌基因分为三类：H-Ras、K-Ras和N-Ras，这三种Ras基因编码为同一蛋白，即Rasp21蛋白[6]。Rasp21蛋白是信号通路中最重要的介导因子，是通过三磷酸鸟苷(GTP)和二磷酸鸟苷(DTP)结合完成细胞信息传递，调节细胞增值。当Ras基因突变时，可导致Rasp21蛋白在关键位点发生氨基酸改变，从而导致Rasp21蛋白一直处于激活状态，使增殖信号过度传入，从而导致细胞增殖失控，进一步导致肿瘤发生、发展[7-8]。本研究发现Ras的表达在正常甲状腺组织及甲状腺乳头状癌中具有统计学差异(P＜0.05)，提示Ras癌基因与甲状腺恶性肿瘤密切相关，而这一结果目前已在多项研究中得到证实，因此检测Ras癌基因在提示预后方面有重要参考价值[9]。而在Ras表达与甲状腺癌淋巴结转移的研究中发现，二者具有统计学差异(P＜0.05)，这提示Rasp21的表达在甲状腺乳头状癌转移中亦具有相关性，目前多数研究认为，Ras基因在甲状腺乳头状癌起作用，与甲状腺癌的组织分化密切相关。

根据以上研究分析，在同一病例均有CD44v6和Rasp21共同表达，联合检测CD44v6和Rasp21两种癌基因蛋白可以对患者甲状腺肿瘤良、恶性的鉴别，有无转移及预后评估提供一定的参考。

表1 CD44v6与Rasp21的表达与临床病理特征关系(n, %)

图1 甲状腺乳头状癌CD44v6(+)(HE染色×200)

图2 甲状腺乳头状癌Rasp21(+)(HE染色×200)

图3 甲状腺腺瘤(HE染色×200)

1 吴孟超，吴在德. 黄家驷外科学［M］. 7版. 北京：人民卫生出版社，2009：1136.

2 Mitchell I，Livingston EH，Chang AY，et al. Trends in thyroid cancer demographics and surgical therapy in the United States［J］.Surgery，2007，142（6）：823-828.

3 Jothy S. CD44 and its partners in metastasis［J］. Clin Exp Metastasis，2003，20（3）：195-201.

4 张秉琪，刘馨，安煜致. 肿瘤标志物临床手册［M］. 北京：人民军医出版社，2008：165.

5 陈文有，张春辉，倪启超，等. 甲状腺肿瘤CD44v6与CXCR4的表达及其意义［J］. 江苏医药，2008，34（7）：659-661.

6 张秉琪，刘馨，安煜致. 肿瘤标志物临床手册［M］. 北京：人民军医出版社，2008：134.

7 Brink M，de Goeij AF，Weijenberg MP，et al. K-ras oncogene mutations in sporadic colorectal Cancer in The Netherlands Cohort Study［J］. Carcinogenesis，2003，24（4）：703-710.

8 Malumbres M，Barbacid M. RAS oncogenes：the first 30 years［J］.Nat Rev Cancer，2003，3（6）：459-465.

9 Boldrini L，Alì G，Gisfredi S，et al. Epidermal growth factor receptor and K-RAS mutations in 411 lung adenocarcinoma：a population-based prospective study［J］. Oncol Rep，2009，22（4）：683-691.