李 敏，张 健，冯立国，李玉娟，冯新民，王 莹，李婷琳

(江苏沿江地区农业科学研究所，江苏 如皋 226541;2.扬州大学园艺与植物保护学院，江苏 扬州 225009)

植物液泡膜H+-ATPase的结构是V型的，在逆 境应答中的功能早已被关注，其分子质量为400000～650000，由7～10个亚基组成，分为亲水的V1亚基组和疏水的 V0亚基组［1］。V1由 A、B、C、D、E、F、G和H亚基组成，主要是催化ATP水解;而V0由a、c、c'、c″、d 和 e 亚基组成，主要是跨内膜形成质子通道［2］。多数研究表明，盐或干旱胁迫能诱导C3、C4植物的V型H+-ATP酶的含量、活性和结构发生变化，尤其以兼性C3/CAM植物冰叶日中花(Mesembry-anthemum crystallinum)最为典型，在NaCl胁迫时，该植物的液泡膜H+-ATPase活性增加了7倍多［3］，说明V型H+-ATP酶是植物对逆境应答的敏感位点。

柳树(Salix viminalis L.)为杨柳科柳属落叶乔木或灌木，生长速度快，是优良的园林绿化树种［4-5］。近年来，江苏沿江地区农业科学研究所开展了耐盐柳树的选育工作，并选育出了一系列耐/敏盐柳树无性系。与普通柳树相比，耐盐柳树具有较强的耐盐碱性，能在含盐量4.0‰左右、pH值10.4的土壤中正常生长，是中国极具潜力的沿海滩涂造林树种［6］，这些耐盐柳树资源为开展柳树耐盐机理研究提供了极好的试材。目前，有关柳树泡膜ATP酶B亚基基因(VHA-B)的克隆及盐胁迫表达方面的研究较少，本试验拟以课题组选育出的耐盐柳树L0911无性系为试材，通过克隆获得VHA-B基因，并分析其在盐胁迫下的表达情况，为进一步开展植物抗逆性基因工程提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 植物材料

试材为江苏沿江地区农业科学研究所选育出的耐盐柳树L0911无性系，该品系是2009年5月在江苏如东东凌沿海垦区种植的竹柳林下发现的幼苗，乔木，速生，新枝红褐色，老枝灰紫色，观赏性强。……