刘 芸，张 洁，王 博，田 疆，毛玲玲，孙英伟，王子江，孙婷婷，姚文清，赵 卓

病毒性出血热是一种临床症状表现为急性发热和出血的疾病，病原体为人兽共患及节肢动物携带传播的RNA病毒。目前在我省最常见的出血热病毒应属布尼亚科病毒。有致肾综合征出血热的汉坦病毒［1－2］和布尼亚病毒［3］。2011年6－8月我省大连地区的农民相继出现不明原因出血样症状 ，一名“蜱咬”患者因疑似肾综合征出血热而就诊于大连市第六人民医院，我们对其展开了流行病学调查及实验室病原体检测。

1 材料与方法

1.1 样本

1.1.1 血液样本 据流行病学调查结果，采集“蜱咬”患者急性期血液样本及同居住地的26份非患者血清样本。

1.1.2 蜱虫样本 该患者有蜱虫叮咬史，入院后在其腋下发现叮咬蜱虫一只。2011年8月又采集了“蜱咬”患者所在地及相邻村庄路边草丛及牛、犬体表叮咬的长角血蜱虫94只，分成19组，放入不同瓶中标记。

1.2 核酸的提取及检测 采用QIAGEN公司提供的EZ1 Virus Mini Kit V2.0试剂盒提取RNA，详细操作步骤按说明书要求进行。采用Real－Time PCR方法检测SFTSV核酸。核酸检测试剂盒由中山大学达安基因公司提供。

1.3 血清学检测 采用ELISA方法对“蜱咬”患者急性期血清样本进行SFTSV的Ig M抗体检测；对同居住地的26份非患者血清样本进行SFTSV的IgG抗体检测。试剂盒由北京万泰生物药业股份有限公司提供。

1.4 病毒分离 将VERO－E6细胞培养至单层（VERO－E6细胞由中国疾病预防控制中心病毒所，以下简称“病毒所”提供。）接种“蜱咬”患者血清、叮咬的蜱悬液以及19组蜱虫研磨悬液0.3 mL，吸附2 h后换维持液，盲传3代，观察细胞病变（CPE）。……