颜秀娟

（上饶市第五人民医院，江西上饶334000）

葛根素，具有耐缺氧、抗衰老、降血脂等作用，并且体外实验显示葛根素对神经细胞的凋亡具有保护作用，可以抑制细胞凋亡时自由基的产生[1]。 然而对葛根素对脑缺血/再灌注损伤的保护作用及具体作用机制并不明确。 本文拟建立大鼠中动脉梗塞模型，观察葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用，探讨其可能的作用机制。

1 材料

1.1 药品、试剂与仪器

葛根素(中国生物制品检验检定所，批号: 100818-20060)，用时用含丙二醇(0.02%)的生理盐水溶解(pH7.0)，尼莫地平(民生药业集团有限公司，批号:100703)，2,3,5-三苯基四氮唑(TTC)，2' ,7'—二氯荧光素酶(DCFH-DA)等(购自Sigma 公司)，荧光分光光度计(上海精密仪器厂)，多功能酶标仪(Thermo)。

1.2 动物

Waster 大鼠，雄性，体重(200±20) g，南昌大学实验动物中心提供。

2 方法

2.1 实验分组

将大鼠随机分成6 组，每组8 只，分假手术组，缺血再灌注模型对照组，给药葛根素0.1、1.0、10mg/kg 组和尼莫地平1.0mg/kg 组。手术前15min 尾静脉给药，假手术组和模型组给予等量的生理盐水。

2.2 局灶性脑缺血模型的建立

参照Zea Longa[2]法制作大鼠中动脉闭塞模型，导致局灶性脑缺血1.5h 后，再灌注18h。 假手术组大鼠除不插拴线外，其他步骤同上，术中保持大鼠肛温(36±1)℃，术后24h，观察其神经系统症状的变化。

2.3 梗死范围和脑水肿的测定

评分结束后，立即断头处死大鼠，取出全脑，去除嗅球、小脑和低位脑干后称取大脑湿重。

2.4 ROS 的含量及Caspace-3 活性测定

参照Chiarugi[3]的方法采用2' ,7'—二氯荧光素酶测定ROS 的产生。取大脑按重量体积比加入10 倍体积冰冷0.1 mol·L 磷酸盐缓冲液匀浆后， 离心10min， 取上清液与终浓度为20μmol/L 的DCFHDA37℃下孵育30 min 后，置于冰浴中终止反应检测荧光强度。……