猪瘟病毒E2蛋白抗原表位集中区的原核表达及鉴定
2013-08-14郭东光朱艳平宁红梅潘耀谦陈明艳王选年
郭东光,朱艳平,银 梅,宁红梅,潘耀谦,刘 卫,陈明艳,王选年,*
(1.河南科技学院,河南新乡453003;2.新乡学院生物技术研究中心,河南新乡453003)
猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病 毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起猪的一oprpaatcott种急性、热性、高度接触性传染病,是危害养猪业的主要传染病之一,该病给全世界养猪业造成了非常大的经济损失[1]。CSFV基因组为12.3kb的单股正链线性RNA,包含一个开放性阅读框架(ORF),编码一个由3 898个氨基酸组成的多聚蛋白。此多聚蛋白经病毒和宿主细胞酶的作用形成4个结构蛋白(C、E0、E1、E2)和8个非结构蛋白(p7、Npro、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)[2]。其中结构蛋白E0和E2是CSFV的两个保护性抗原,两者均能诱导产生猪瘟病毒的中和抗体,并使免疫猪抵抗致死剂量CSFV的攻击[3]。目前公认CSFV囊膜蛋白E2是最主要的保护性抗原,含有CSFV高度保守的抗原决定簇[4]。
E2蛋白(Arg690Gly1062)分子质量为51ku~55ku,是CSFV的主要跨膜结构蛋白[5]。1989年Wensvoort G等[6]利用单抗竞争结合和抗原捕获试验对E2蛋白的抗原结构分析,表明E2蛋白上存在4个抗原区,即A/D和B/C,并且这4个区均位于E2蛋白N端氨基酸残基690~866之间,所以又称之为抗原表位集中区。在E2蛋白的4个抗原区中,A1、B和C区域的抗原表位均可诱发动物的保护性免疫反应,且B、C结构域含有中和抗体的结合位点[7]。Zhou B等[8]利用原核表达系统表达了该抗原区两个B细胞线性表位,rE-2a(CFRREKPFPHRMDCVTTTVENED,aa844~865)和rE2-b(CKEDYRYAISSTNEIGLLGAGGLT,aa693~716),免疫攻毒试验表明均能产生很好的免疫保护力。Lin等通过缺失分析确定了E2蛋白上的一个线性表位TAVSPTTLR,其在E2蛋白上位于氨基酸残基829~837个之间,并且这一序列在CSFV毒株中是极其保守,而在BVDV和BDV毒株中差异极大[9]。Liu等根据这一极度保守的线性B细胞表位设计了GST-M重组抗原,接种兔和猪均能产生有效的免疫保护[10]。……
