赵 德，李 鹏，2，高凤山＊，冯 磊，许崇波

（1.大连大学生命科学与技术学院，辽宁大连116622；2.河北省涿鹿县医院，河北涿鹿075600）

猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea，PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）引起的以腹泻、呕吐和脱水为特征的猪肠道传染病［1-3］。从2010年以来，猪流行性腹泻开始在全国流行，导致仔猪腹泻，甚至死亡，给养猪业造成了严重的损失［4］。目前，传统的猪流行性腹泻疫苗已经不能完全控制疫情的传播和发生。在此情况下，研制新型的猪流行性腹泻疫苗非常必要。

乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）是一种易通过黏膜吸收的常在菌，适量的乳酸菌对维持肠道菌群平衡具有积极意义。NIZO公司近年来开发了乳酸乳球菌载体表达系统，在该载体上表达的外源基因很容易通过黏膜吸收；另外，该载体为食品级，不含有任何抗生素基因或其他有害成分［5-7］。利用该表达系统研制的疫苗，不仅具有良好的免疫效果，而且具有易吸收、无副作用的特点。

本研究以构建的猪流行性腹泻病毒乳酸菌载体疫苗为免疫原接种小鼠，测定其体重增长、抗体产生及IFN-γ产生等，为猪流行性腹泻病毒乳酸菌载体疫苗在猪体的免疫试验提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 4周龄的SPF级雌性Balb／c小鼠30只，平均体重25g，由大连医科大学实验动物中心提供。

1.1.2 试剂 乳酸乳球菌表达载体pNZ8149及乳酸乳球菌LactococcuslactisNZ3900购自荷兰NIZO研究所。乳链菌肽（Nisin）购自Sigma公司，PEDV抗体ELISA检测试剂盒由哈尔滨兽医研究所冯力研究员课题组提供，小鼠IFN-γ购自凯基生物公司（南京），其他生化试剂均为国产分析纯产品。……