秦先锋 朱惠明 刘玉杰

（广东省东莞市中山大学附属东华医院，广东 东莞 523110）

RegⅣ和EGFR在大肠癌中的表达

秦先锋 朱惠明 刘玉杰

（广东省东莞市中山大学附属东华医院，广东 东莞 523110）

目的 研究再生基因蛋白Ⅳ(RegⅣ)及表皮生长因子受体( EGFR)在大肠癌中的表达及其临床意义。方法 应用S-P免疫组化技术检测57例大肠癌及其相应的癌旁正常组织中RegⅣ和EGFR的表达。结果 57例大肠癌组织中RegⅣ、EGFR的阳性表达率均高于癌旁正常组织，差异具有统计学意义。RegⅣ与EGFR在大肠癌组织中的表达呈正相关关系。结论 RegⅣ可能通过激活EGFR/PI3K/Akt信号系统在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。

再生基因蛋白Ⅳ；大肠癌；表皮生长因子受体；免疫组织化学

大肠癌是全世界最常见的癌症之一，在中国的发病率呈逐年上升的趋势。大肠癌临床上发现时，大多已经处于中晚期，治疗后5年存活率仍然较低。通过对大肠癌癌变过程中复杂的分子机制的研究，有可能使得大肠癌的治疗取得较大的突破。

Reg基因家族是钙依赖性凝集素超家族，在一些胃肠道肿瘤中表达上调，参与细胞增殖和分化，RegⅣ是其中一个新成员。RegⅣ在克罗恩病和溃疡性结肠炎表达，并与大肠癌的恶性潜能和大肠腺瘤的恶性转化能力相关。最近，RegⅣ已被证明可激活EGFR，蛋白激酶B/Akt和激活蛋白1，延长大肠癌细胞的存活，增加Bcl-2，Bcl-xL和survivin的表达。本研究采用免疫组化染色法检测RegⅣ与EGFR在大肠癌及癌旁正常组织中的表达，探讨RegⅣ和EGFR与大肠癌的关系，以及RegⅣ蛋白在大肠癌中的可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 研究对象

本研究的标本随机取自郑州大学第一附属医院病理科2003年10月至2004年12月间手术切除的存档蜡块57例。男性28例，女性29例；中位年龄56岁（31～78岁）。所有患者术前均未接受化疗，放疗或其他针对肿瘤的治疗。按Dukes分期为A+B期31例，C+D期26例；病理类型为管状腺癌21例，管状乳头状腺癌15例，黏液腺癌11例，印戒细胞癌10例；组织分化程度为高分化21例，中低分化36例；常规淋巴结检查淋巴结转移26例。

1.2 试剂及来源

抗体及免疫组化试剂盒均购自北京中杉公司。

1.3 研究方法

采用SP免疫组化技术，主要步骤如下：切片常规脱蜡和水化后，以柠檬酸缓冲液高温高压修复抗原，用3%H2O2作用10min，除去内源性过氧化物酶，以稀释的羊血清封闭10min，加入一抗在湿盒里4℃过夜，PBS洗涤后加生物素标记的二抗，第二代辣根酶标记链霉菌素工作液孵育各10min，PBS冲洗三次，最后在DAB溶液中显色5min，自来水冲洗，苏木素复染，乙醇梯度脱水，封片观察。

1.4 结果判定

阳性细胞必须具备：细胞结构清晰，阳性染色定位准确，着色明显高于背景。结果判断采用半定量积分法，根据每张切片的阳性细胞比例及着色深浅计数。阳性细胞比例1/3以下为1分，1/3～2/3为2分，2/3为3分；细胞无着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。根据二者乘积判断阳性等级：（0～3分）为阴性，（4～9分）为阳性。用已知阳性切片作为阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。

1.5 统计学处理

应用统计分析软件SPSS16.0进行统计分析，检验水准α=0.05。

2 结 果

2.1 RegⅣ和EGFR的表达

57例大肠癌组织中，RegⅣ蛋白阳性表达率52.6% (30/57)，其阳性表达部位为细胞质；EGFR的阳性表达率59.6% (34/57)，阳性表达部位为细胞膜，见表1。

表1 RegⅣ和EGFR在大肠癌中的表达

2.2 REGⅣ和EGFR表达的相关性

REGⅣ和EGFR共同阳性表达的例数为29例，共同阴性表达的例数为17例，经Spearman等级相关检验，本组标本中REGⅣ表达阳性率同EGFR表达阳性率存在显著正相关关系。

3 讨 论

Reg代表一组小的细胞再生和增殖所必需的分泌蛋白，形成一种免疫系统。人的Reg家族中，人RegⅣ基因位于1号染色体上。RegⅣ可在各种正常组织表达，如胃，大肠，小肠和胰腺，但其表达水平较癌组织中要低得多。有研究已经证明[1]，在大肠癌组织中高表达RegⅣ蛋白。RegⅣ在大肠肿瘤相对于正常大肠组织，其表达增高。用PCR测定，大肠癌中RegⅣ基因的表达显著高于正常组织。RegⅣ的抗凋亡特性与大肠癌的进展和大肠癌化疗耐药性密切相关，RegⅣ的表达有望成为一个标记高度恶性潜力的生物学标志物[2-4]。本研究发现，RegⅣ在大肠癌中高表达，显著高于癌旁正常组织中的表达，与文献报道相符，进一步证实了RegⅣ在大肠癌中的作用。不仅是大肠癌，同时也有很多报道表明[5]，RegⅣ在其他恶性肿瘤中的表达也是增高的。

表皮生长因子受体（EGFR）是一种跨膜蛋白，属于ErbB家族受体酪氨酸激酶（RTK）。它被激活后与EGF家族的肽生长因子结合，其中包括表皮生长因子（EGF），转化生长因子-α（TGF-α）等，通过与配体结合诱导ErbB受体聚合物和异二聚体，导致细胞质的激酶结构域的酪氨酸激酶自身磷酸化和激活。研究发现[6-8]，EGFR的高表达与多种肿瘤的发生、发展有关，同时也有很多报道表明[9,10]，EGFR与大肠癌的发生、发展有很大关系。本研究发现，EGFR在大肠癌中高表达，显著高于癌旁正常组织中的表达，与其他相关研究一致，进一步证实了EGFR在大肠癌中的作用。

RegⅣ激活的信号转导通路知之甚少。表皮生长因子受体在MKN28和TMK1细胞中形成自分泌和旁分泌环路。据报道，高磷酸化水平的表皮生长因子受体和RegⅣ在MKN28和TMK1细胞系中，RegⅣ与EGFR的高磷酸化水平与EGFR的磷酸化有关。许多研究表明，阳性表达EGF和RegⅣ之间存在反馈回路中的信号通路。因此，阻断Reg Ⅳ/EGFR信号传导可作为人胃肠腺癌的潜在的治疗干预措施。本研究发现，RegⅣ和EGFR在大肠癌中的表达呈正相关，进一步从蛋白水平证实了上述观点。

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Reg Ⅳ and EGFR Expression in Colorectal Cancer

QIN Xian-feng, ZHU Hui-ming, LIU Yu-jie
(Donghua Hospital Affiliated Sun Yat-sen University of Dongguan, Dongguan 523110, China)

Objective To investigate the relationship and clinical significance between the expressions of RegⅣ and EGFR in colorectal cancer. Methods S-P Immunohistochemistry was used to detect the expression of RegⅣ and EGFR in pathological tissue with 57 cases of colorectal cancer and tumor-adjacent normal colorectal tissue. Results The positive expression rates of RegⅣ and EGFR proteins in 57 cases of colorectal cancer were significantly higher than the positive expression rates of tumor-adjacent normal colorectal tissues respectively. There was positive correlation between the expression of RegⅣ and EGFR in colorectal cancer. Conclusions RegⅣ may play an important role in tumorigenesis and tumor progression by activating EGFR/PI3K/Akt signaling pathway.

Regenerating gene typeⅣ(RegⅣ); Colorectal cancer; Epidermal growth factor receptor (EGFR); Immunohistochemistry

R735.3+4；R446

B

1671-8194（2013）36-0010-02