张明森 丘力功 韦 剑 王灿顶 黄 明

利用菌体生长限制效应的HBV DNA疫苗发酵工艺※

张明森 丘力功 韦 剑 王灿顶 黄 明

目的对HBV DNA疫苗工程菌的发酵工艺进行优化。方法首先通过摇瓶培养确定基础培养基组成，提高单位菌量的质粒表达量。其次，在40 l发酵阶段，通过溶氧反馈调节的补料方式产生生长限制效应，进一步获得高拷贝表达质粒的菌体。结果培养基优化后的工程菌DH5α/pS2S发酵最终可获得质粒304.99mg/l，质粒含量可达到2.40mg/g湿菌，超螺旋质粒DNA的比例达95%以上。结论已建立了在单位体积和单位菌量内高表达质粒HBV DNA疫苗工程菌的发酵工艺，为HBV DNA疫苗的工业规模化生产奠定了基础。

治疗性HBV DNA疫苗；工程菌；发酵；生长限制

治疗性HBV DNA疫苗项目为正在进行临床研究的国家I类新药项目。HBV DNA疫苗含有preS2＋S基因的真核表达载体质粒，不仅能诱导体液免疫反应，还能诱导细胞免疫反应，从而打破机体因HBV长期感染所引起的免疫耐受，改善机体内环境，恢复或重建机体的特异性免疫功能，在治疗慢性乙型肝炎方面具有广阔的临床应用前景[1]。原有的发酵工艺[2]虽能产出足够量的质粒用于下游的质粒提取纯化，但由于单位菌量内质量含量不高，增加了下游的纯化负担和成本，有必要为此进行改进以适应临床Ⅲ期和上市后的用量需求。本文利用产生饥饿效应的策略对发酵培养工艺进行了优化，在质粒产量和单位菌量质粒含量等方面取得显著所改进。现将结果报告如下。

1 材料

工程菌DH5 α/pS2S，拜迪公司保存；……