麻馨月 赵 雪

(吉林农业科技学院生物工程学院，吉林 吉林 132101)

Her-2基因特异性核酶体外表达载体的建立

麻馨月 赵 雪

(吉林农业科技学院生物工程学院，吉林 吉林 132101)

目的构建人表皮生长因子受体-2(HER-2)特异性核酶(ribozyme，RZ)体外表达载体的建立。方法设计合成RZ基因，将该RZ克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中，测序鉴定。结果经DNA测序分别证实合成的RZ基因序列克隆入pcDNA3.1(+)中。结论构建HER-2特异性RZ真核表达载体有助于进一步研究RZ对靶基因切割作用及雌激素受体阴性乳腺癌细胞MDA-MB-453中HER-2信号转导.

人表皮生长因子受体-2(HER-2)；核酶

雌激素受体阴性乳腺癌恶性程度比较高，对内分泌治疗具有效率低，易转移复发，预后较差，生存率较低等特点，因而成为研究的热点和难点问题之一[1]。在雌激素受体阴性乳腺癌中，人表皮生长因子受体-2(HER-2)[2-4]常常呈现高表达状态，进行雌激素受体阴性乳腺癌HER-2及其相关因子的研究，有助于确定HER-2在雌激素受体阴性乳腺癌细胞生长、增殖及乳腺癌从激素依赖型转变为非激素依赖型中的作用，寻找可能的治疗靶点。本研究根据HER-2基因序列，设计并合成核酶基因，构建HER-2基因特异性锤头状核酶真核表达载体，为检测该核酶在体外对靶基因HER-2的作用，研究雌激素受体阴性乳腺癌细胞中HER-2信号转导途径相关因子的相关性及其分子机制和HER-2作为肿瘤基因治疗靶点提供实验与理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

限制性内切酶、DNA连接试剂盒、质粒小提试剂盒、DNA凝胶回收试剂盒、RT-PCR试剂盒均购自Takara公司；……