柯金山，吴 霁，柯琴梅，范 恒

(1上海杨思医院，上海200126;2南昌大学第三附属医院;3华中科技大学同济医学院附属协和医院)

目前认为，免疫因素在溃疡性结肠炎的发病中起重要作用［1］。NF-κB是具有多向转录调节作用的蛋白质，NF-κB活化后，可促使巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞分泌细胞因子(如IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α等)、黏附分子、急性期蛋白分子，在溃疡性结肠炎的发生及在免疫反应中起重要作用［1，2］。美沙拉嗪是一种新型5-氨基水杨酸控释剂，对溃疡性结肠炎有良好的疗效而无明显不良反应。已有研究表明，美沙拉嗪可抑制大鼠结肠组织NF-κB的表达发挥治疗溃疡性结肠炎的作用［3］。脾脏是T细胞居住场所以及细胞免疫应答场所，在固有免疫和适应性免疫反应中都起着重要作用［4］，有研究表明，脾脏T细胞数目及功能与机体免疫反应呈正相关［5，6］。目前尚未见关于美沙拉嗪治疗对脾脏组织NF-κB表达影响的相关报道。因此，2010年4月～2011年8月，我们应用2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导大鼠溃疡性结肠炎，观察美沙拉嗪治疗对脾脏组织NF-κB mRNA和蛋白表达的影响。

1 材料与方法

1．1 材料 雄性SD大鼠46只，SPF级，体质量(250±20)g，由华中科技大学同济医学院动物中心提供，在湿度为50% ～70%、温度为20℃动物房内饲养;实验动物质量合格证为 SCXK(鄂)2004-0007，使用许可证为 SYXK(鄂)2004-0028。5%的TNBS购于美国Sigma公司;Trizol购于Invitrogen公司;RNA提取试剂盒DP430、cDNA第一链合成试剂盒KR104-02、RNase抑制剂DP418购于天根公司;引物合成于金斯瑞公司;SYBR Green PCR Master Mix(2X)#K0242购于Fermentas;实时荧光定量PCR仪ABI7500。引物由Primer6．0软件设计，每对引物序列如下:NF-κB p65上游引物5＇-GACCTGGAGCAAGCCATTAG-3＇， 下 游 引 物 5＇-ATCTTGAGCTCGGCAGTGTT-3＇;扩增产物片段长度为215 bp，退火温度 51℃。……