张 朋，曹 纬，周初松，吕 海，蔡进奎，陈 仲

腰椎椎间盘退变突出是脊柱外科常见疾病，通过制备具有天然三维结构的髓核基质支架来构建组织工程化髓核，可能有助于改变目前主要通过摘除髓核并内固定手术治疗的模式［1-3］。到目前为止，髓核组织工程支架材料在物理性能、生物性能与正常髓核相比仍有较大的差距，尚无与髓核结构高度相似且理化性能相近的支架材料。为此，本实验试图研究机械振荡及去污剂浓度对髓核脱细胞程度及其基质形态学变化的影响［4］，探讨制备髓核去细胞支架的方法，为构建具有天然髓核基质结构的组织工程化髓核提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物和器材

新西兰兔(南方医科大学动物实验中心)，Triton X-100(Amresco)，PBS 缓冲液、HE 染色试剂、脱氧胆酸钠［罗基(北京)生物技术有限公司］，恒温回旋振荡器(南方医科大学附属南方医院中心实验室)，扫描电镜(南方医科大学药学院实验室)。

1.2 兔髓核的来源

健康成年兔，雌雄不限，重2～3 kg。采用空气栓塞的方法将兔处死。然后行兔后背正中切口暴露并游离相应椎间盘、取出髓核。每段长约0.5 cm，分为7 个组，每组5 块，行脱细胞处理或作为空白对照，其中2 块用于石蜡切片，2 块用于扫描电镜观察。

1.3 髓核的预处理和化学萃取

先在手术显微镜下去除非髓核组织，然后进行萃取处理。A、B、C、D 4 组的萃取振荡频率分别0、80、130、180 r/min，C1、C2、C3 组的去污剂浓度分别为1%、3%、5%，其余各组的浓度均为3%。E 组为对照组，不作处理。萃取步骤:①浸入去离子水中浸泡12 h［5］;②将髓核分别放入相应浓度Triton X-100 的PBS 溶液中。……