张勇

楚雄医药高等专科学校药学系，云南楚雄675000

正交试验法优选槐花米中芸香苷水提取工艺

张勇

楚雄医药高等专科学校药学系，云南楚雄675000

目的：对以水为溶剂碱提酸沉法提取槐花米中芸香苷的影响因素进行优选，为提取工艺优化提供参考依据。方法：以水为溶液，槐花米为原料，采用L18（37）正交试验对影响芸香苷提取收得率的诸因素进行优选，寻找芸香苷提取的最佳工艺条件。结果：经过实验，药材粉碎度、提取次数、提取水溶液的pH、酸沉时的pH值对产品收得率影响显著，影响提取收得率指标的因素为A＞D＞B＞F＞G＞E＞C。结论：提取最佳工艺条件为A3→D3→B2→F2→G1→E2→C3，即：药材为细粉、提取3次、提取水溶液的pH9、酸沉pH值4、结晶时间12小时、提取时间30分钟、水溶液的用量1：30倍。

槐花米；芸香苷；碱提酸沉法；正交试验

槐花米是一种常用中药，为豆科植物槐SophorɑjɑponicɑL.的干燥花及花蕾，主要有效成分是芸香苷又名芦丁（Rutin），其化学结构为5，7，3′，4′－四羟基－3－芸香糖黄酮，含量高达12%～20%［1］。以槐花米为原料提取芸香苷，有多种提取工艺，如水提法、碱提酸沉法、醇提法等，其中碱提酸沉法有操作简单，经济、安全的特点，故以水为溶剂采用碱提酸沉法从槐米中提取芸香苷的工艺最常用。但提取率受诸多因素（药材的粉碎度、水溶液的pH、水溶液的用量、提取次数、提取时间、酸沉pH值、结晶时间）的影响。经资料查阅［2－7］，只对其中二三个因素进行过研究或优选，同时对芸香苷提取收得率的7个因素进行优选尚未见报道。本实验以水为溶媒，槐花米为原料，以药材的粉碎度、水溶液的pH、水溶液的用量、提取次数、提取时间、酸沉pH值、结晶时间七个因素，采用L18（37）正交试验对影响芸香苷提取收得率的诸因素进行优选，以便寻找芸香苷提取的最佳工艺条件。

1 材料与方法

1.1 材料槐花米药材由云南省楚雄州药材公司提供（经粉碎后过筛，压碎的槐花米过10目筛；细粉过20目筛）；薄层层析硅胶G（青岛美方化工有限公司）；芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号100080－200306）；所用试剂均为分析纯。

1.2 仪器TN－100B千分之一托盘扭力天平（上海精密科学仪器有限公司），SH2－D3型循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限公司），101A－3型电热鼓风恒温干燥箱（上海市崇明实验仪器厂），PHS－3C数字酸度计（上海鹏顺科学仪器有限公司），SUV－1箱式紫外分光分析仪（上海科学器材公司）。

1.3 正交设计以槐花米中所含成分芸香苷的提取收得率为评价指标，采用L18（37）正交试验对影响槐米的水煎煮提取效果诸因素（A药材的粉碎度、B水溶液的pH、C水溶液的用量、D提取次数、E提取时间、F酸沉pH值、G结晶的时间）进行优选。对因素A、B、C、D、E、F、G在试验范围内分别选取三个水平如下：

A药材的粉碎度：A1＝未粉碎、A2＝压碎、A3＝细粉；B水溶液的pH：B1＝pH8、B2＝pH9、B3＝pH10；C水溶液的用量：C1＝1：10倍、C1＝1：20倍、C1＝1：30倍；D提取次数：D1＝1次、D2＝2次、D3＝3次；E提取时间：E1＝15分钟、E2＝30分钟、E3＝45分钟；F酸沉pH值：F1＝pH2、F2＝pH4、F3＝pH6；G结晶时间：G1＝12小时、G2＝24小时、G3＝36小时。

采用正交试验方案需进行18次实验，正交试验具有典型性、代表性、大大减少试验次数，正交表中所选出的试验满足“均匀分散和整齐可比，易于使用数理统计方法处理实验结果”［8］。

1.4 实验方法选用不同粒度的槐花米药材，称取20g，加0.4%的硼砂［9］水溶液按料液比加入，用石灰乳调节提取溶液pH后，按照实验设计方法进行提取，四层纱布过滤，滤液常温下放冷后，加浓HCl调pH，放置结晶，析出淡黄色沉淀，减压抽滤，沉淀物室温凉干后加200倍量蒸馏水加热煮沸溶解，趁热抽滤，滤液放置结晶，析出淡黄色沉淀，减压抽滤，然后用蒸馏50ml水洗3次，抽干，得到的芸香苷，将芸香苷罝于60℃烘箱中干燥8h，移至干燥器中放置1h后称重，计算提取收得率（提取收得率＝芸香苷质量／槐米质量）。

1.5 定性分析取提取得到的芸香苷溶解制成1%的乙醇溶液后，与相同方法制成的芸香苷标准品点于同一块硅胶G－CMC－CNa薄层板上，以氯仿－乙醇－冰醋酸（15：5：1）为展开剂，以1%三氯化铝乙醇溶液喷雾显色，显色前后分别于紫外灯（波长为254nm）下检测，与芸香苷标准品对照，计算Rf值，确认提取物中含有芸香苷。另外进行盐酸－镁粉反应，观察颜色进行鉴别并与对照品对照。

2 结果与分析

2.1 提取结果利用正交表的整齐可比性，利用统计学方法，计算并分析各因素对提取率的影响。由表1中可看出，各因素极差为A＞D＞B＞F＞G＞E＞C；故影响提取收得率指标的因素为A＞D＞B＞F＞G＞E＞C，比较各k值，取各因素中较大的值，即提取条件为：A3→D3→B2→F2→G1→E2→C3。

2.2 定性检测盐酸—镁粉反应，样品与对照品进行比较，颜色一致均为紫红色。经薄层色谱展开并显色后均呈淡黄色斑点，在紫外分析仪下观察均为亮黄色斑点；测量Rf结果，Rf样＝Rf标＝0.56，因此提取物中含有芸香苷。

3 统计分析

从表2芸香苷的方差分析表中可看出，各因索对试验结果的重要次序为：A＞D＞B＞F＞G＞E＞C，由方差分析可知，A药材粉碎度、B提取水溶液的pH、D提取的次数和F酸沉pH值对芸香苷提取收得率有显著影响，而从选定的水平中E提取时间和G结晶时间影响不太显著，而C料液比影响最小。这与表1芸香苷正交试验直观分析总表所得结果是一致的，故影响提取收得率指标的因素为A＞D＞B＞F＞G＞E＞C，即提取条件为：A3→D3→B2→F2→G1→E2→C3。

表2 芸香苷的方差分析表

4 讨论

以槐花米为原料，以所含成分芸香苷的提取收得率为考查指标，由表1和表2可以得出结论，各因素对实验结果影响显著的有A、B、D、F，提取最佳工艺条件为A3→D3→B2→F2→G1→E2→C3，即：A药材为细粉；D提取3次；B提取水溶液的pH9；F酸沉pH值4；G结晶时间12小时；E提取时间30分钟；C水溶液的用量1∶30倍；从效应曲线图中可看出其中对实验结果影响显著的4个因素中，随着药材粉碎度和提取次数的增大收得率提高；而提取水溶液的pH、酸沉pH太高和太低都会降低收得率，提取时间在30分钟，料液比增大会增加收得率但溶媒太多不利于后续操作，且水溶液用量的极差k1与k3相差很小，所以水溶液的用量1：10倍即可，而G（结晶时间）溶液冷却即开始析出，超过12小时基本已沉淀完成。

［1］郭丽冰.芸香苷的提取、分离和鉴定［M］.北京：中国医药科技出版社，1998：45.

［2］舒晓宏，冯梅，陈华，等.槐花米中芦丁提取最佳pH值的实验研究［J］.大连医科大学学报，2005，27（2）：91.

［3］廖卫华，李瑞珍，黄敏仪.槐花米中药用有效成分芦丁提取方法研究［J］.现代食品与药品杂志，2006，16（3）：73－75.

［4］张雅杰，佟连生，高俊茹，等.两种芦丁提取方法pH值的比较研究［J］.黑龙江医药科学，2008，31（3）：44.

［5］李金秀，龚盛昭，黄秋瑾.芸香甙提取工艺的改进研究［J］.广东化工，2003，30（1）：15－17.

［6］廖卫华，邓金梅，宋粉云.正交法优化槐米中芦丁的提取工艺［J］.广东药学院学报，2006，22（3）：275－276.

［7］叶会呈，谢路凤.正交法优选槐花米中芦丁的提取工艺［J］.数理医药学杂志，2008，21（3）：354－355.

［8］刘定远.医药数理统计方法（第三版）［M］.北京：人民卫生出版社，1999：155.

［9］卢艳花.魏东芝.蒋晓萌.中药有效成分提取分离技术（第二版）［M］.北京：化学工业出版社，2004：106.

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1007－8517（2013）22－0010－02

2013.09.28）