曹 健，王 芳，钱 青，蒲秀英

(中国人民解放军第三军医大学第二临床医学院药学部，重庆 400037)

新咳喘宁合剂是第三军医大学新桥医院的非标准制剂(成制字2006F09026号)，其主要成分为氨茶碱、盐酸异丙嗪、氯化铵、复方樟脑酊等，主要适应证为止咳、祛痰、平喘，适用于急、慢性气管炎、老年性支气管哮喘等。采用紫外法测定制剂中氨茶碱的含量，由于萃取过程容易引起操作误差，故常常出现测定的样品含量偏低，由于氨茶碱具有明显的毒副作用，安全范围小，个体差异大，进一步提高完善该制剂的质量标准，建立准确可靠的分析方法，对于保护使用者的健康，规范药品市场具有重要意义。本试验采用高效液相色谱法测定新咳喘宁合剂中氨茶碱的含量，取得了较满意的效果。现报道如下。

1 仪器与试药

Waters 600 Controller高效液相色谱仪;可变紫外检测器;Hypersil ODS C18色谱柱(150 mm ×4．6 mm，5 μm);SH2-D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司);BS1245型万分之一天平(德国Sartorius公司);PHS-3C型精密pH计(上海雷磁精密科学仪器有限公司)。新咳喘宁合剂(新桥医院自制，批号为110228，100521，100929);甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Hypersil ODS C18柱(150 mm ×4．6 mm，5 μm);流动相:水 -甲醇(70∶30);流速:1．2 mL/min;柱温:30℃;检测波长:270 nm;进样量:20 μL。在上述色谱条件下，取阴性对照品溶液、对照品溶液及供试品溶液各20 μL进样，结果表明氨茶碱峰形良好，理论板数按氨茶碱峰计算不低于2 000，与相邻色谱峰的分离度大于3。色谱图见图1，结果阴性样品在氨茶碱峰处未见干扰色谱峰，说明本品的辅料对氨茶碱的含量测定无干扰。

图1 氨茶碱的高效液相色谱图

2．2 溶液制备

精密称取氨茶碱对照品0．101 3 g，置50 mL容量瓶中，加甲醇适量使其溶解，超声处理，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液，精密吸取对照品贮备液2．5 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取新咳喘宁合剂2．5 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。按照处方比例制备缺氨茶碱的阴性样品，称取氯化铵0．5005 g，量取复方樟脑酊 2．5 mL，橙皮酊 0．5mL，远志酊 2．5 mL，加水至 25 mL，取 2．5 mL置 25 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

线性关系考察:取2．2项下对照品贮备液，精密吸取1．0，2．0，3．0，4．0，5．0 mL 分别置 25 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取20 μL，按拟订色谱条件进样测定，以质量浓度(X)为横坐标，以峰面积(Y)为纵坐标进行线性回归。结果表明，氨茶碱质量浓度在81．0～405．20 μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系，回归方程为 Y=4．56×104X ＋8．95×104，r=0．999 9(n=5)。

精密度试验:取对照品溶液，按拟订色谱条件重复进样6次，每次20 μL，记录氨茶碱峰面积值。结果的 RSD为0．1%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取供试品溶液，分别于0，1，2，4，8 h时进样1次，记录氨茶碱峰面积值。结果的 RSD分别为1．19%，1．04%，1．21%，表明供试品溶液在8 h内稳定。

重复性试验:取同一批新咳喘宁合剂，共6份，按供试品溶液制备方法制成供试品溶液并按拟订色谱条件测定。记录峰面积值，计算氨茶碱的含量。结果样品中氨茶碱的平均含量为220．78 μg/mL，RSD=0．3%，表明该方法重现性良好。

回收率试验:精密称取氨茶碱0．107 0 g置100 mL容量瓶中，加适量水使其溶解，按处方比例加入辅料，超声处理30 min，加水稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取 2．0，4．0，5．0mL各 3 份，共9 份，分别置25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，取滤液作为供试品溶液，依法测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 氨茶碱回收率试验结果(n=6)

2．4 样品含量测定

精密量取不同批号新咳喘宁合剂，按供试品溶液制备方法制成供试品溶液，依法测定。记录峰面积值，按外标法计算其中氨茶碱的含量。结果批号为110228，100531，100929的3批样品中，氨茶碱的含量分别为 198．83，192．21，200．58 μg/mL。

3 讨论

选择高效液相色谱法的色谱条件，因盐酸异丙嗪在252，275，302 nm波长处有较大紫外吸收，氨茶碱在241，270 nm波长处有较大紫外吸收，参考2010年版《中国药典(二部)》[1]，在254 nm波长处可同时测定2个物质，但试验结果发现，在氨茶碱的测定浓度下盐酸异丙嗪峰信号很弱，新咳喘宁合剂中辅料在254 nm波长处背景吸收较大，而在270 nm波长处背景吸收相对较小，比较两处波长处的回收率和检测的灵敏度，本试验选用270 nm作为氨茶碱的检测波长[2]。

将高效液相色谱法测定结果与紫外法测定结果进行比较，紫外法测定，样品前处理繁琐，测定结果偏低，但测定相对快捷，适用于中间品的检测，高效液相色谱法测定所需时间较长，测定结果更加准确，适用于成品的含量控制。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典(二部)[M]．北京:中国医药科技出版社，2010:702-703．

[2]谭瑞成．HPLC同时测定复方盐酸麻黄碱滴鼻液中4组分的含量[J]．中国药学杂志，1999，32(2):82．