孔凡虎 朱应民 许海军 杨志强 徐文彬 （山东省烟台市畜牧兽医工作站 264001）

肉羊鲜精液态保存技术研究进展

孔凡虎 朱应民 许海军 杨志强 徐文彬 （山东省烟台市畜牧兽医工作站 264001）

目前我国已经引入了德国肉用美利奴、夏洛莱、萨福克、特克塞尔、无角陶塞特等优质肉用羊品种，利用引进的肉用品种进行当地绵羊品种改良，已经取得了较好效果。为了提高引用肉用公羊的利用率，迅速扩大肉用羊的繁殖数量，采用鲜精低温保存方法进行人工授精是较为直接有效的方法。鲜精低温保存技术大大延长了肉羊精子的存活时间，提高了优良种公羊精液的利用率，扩大了配种范围。

1 肉羊鲜精保存技术

精液液态保存可以方便地用于现场的人工输精，按温度可以分为常温保存(20～25℃)和低温保存(0～5℃)两种，常用的为4～5℃保存。羊精液在4℃的保存效果要优于常温的保存效果，较低PH、较高渗透压的稀释液更有利于羊精液的保存。低温保存鲜精是指暂时地抑制或者停止精子的运动，降低其代谢速度，减缓其能量消耗，以便达到延长精子寿命而又不使其丧失受精能力。

2 肉羊鲜精保存稀释液成分

2.1 糖类 主要作用是提供精子营养和补充精子能量，还具有低温保护性能和稳定细胞膜蛋白质—脂类复合物的作用。Salamon等(1967)报道，三糖的低温保护性能高于双糖和单糖。Nauk(1974) (1991)发现，几种糖类稳定细胞膜蛋白质—脂类复合物的性能大小顺序为：棉子糖＞蔗糖＞ 乳糖＞ 果糖＞ 葡萄糖，且某种糖与另一种糖配合使用的效果比单一使用要好。Salamon 等(1972) 研究证实，在Tris液中葡萄糖的效果优于果糖、乳糖和棉子糖。高维强(2012)研究表明，在15℃条件下，MES稀释液稀释液中添加10mM果糖效果最好，精子活力保持30%以上的保存时间能达到6d。

2.2 奶类和卵黄 稀释液中加入一定数量的奶类和卵黄，具有调节渗透压、降低精液中电解质浓度、保护精子膜等作用，有利于精子的存活，另外还具有防冷冻和防冷休克的作用。卵黄有维持精子活力、保护精子顶体和线粒体膜的作用，这些保护性能是由于其脂蛋白浓度较低的缘故(Watson等，1973)。刘长河(2010)研究了以MES卵黄包被液态保存山羊精液16d，精子活力维持在30%以上。

2.3 缓冲物质 在稀释液中加入缓冲物质的目的是保证精液适宜的pH值，以利于精子的存活。在缓冲物质中，无论是山羊还是绵羊，均以三羟基甲氨基甲烷(Tris)效果最好，Tris不仅有良好的缓冲性，另外还具有利尿性和渗透性，且高浓度对精子的毒性也很底(Nahas，1961)。salvador等(2006)研究了以乳汁为基础的稀释液中添加明胶和半胱氨酸对5℃条件下山羊精子的影响，结果发现保存72h后，添加明胶组精子的活力可达67%。

2.4 抗生素及其它 虽然羊的人工授精过程中各个环节均在严格的操作下进行，有时精液也难免受到某些微生物的污染，加入抗生素的目的是为了保护精子的抗菌作用。羊的精液稀释液中抗生素的用量一般为：青霉素1000U/ml；双氢链霉素1000μg/ml。左福元等(2002)报道，硫酸庆大霉素100U/ml优于青霉素和链霉素。有的资料上报道恩诺沙星的效果较好。黄成全等(1997)报道，将5mmol/L的咖啡因添加于冷冻前的山羊稀释精液中，能显著提高山羊精液的解冻后活率，增强精子的耐冻性；使山羊冷冻精液配种的情期受胎率提高9.58%。徐刚毅等(2002)指出：用VB12注射液稀释小尾寒羊鲜精液，使用方便，不需人工配制，随用随取。稀释后的精液能扩大精子的运动空间，降低异物对精子的不良影响，补充精子在体外所需的营养；延长精子在体外的存活时间。在5～10℃冰箱中保存鲜精，能抑制精子的运动和代谢，降低精子的能量消耗，延长精子寿命。因此，用VB12注射液做为小尾寒羊鲜精稀释液，在5～10℃冰箱中保存，可明显延长精子的有效存活时间，值得在绵羊鲜精液保存中推广应用。

3 肉羊鲜精液态保存对精子存活时间的影响

鲍志鸿等(2004)报道在0～4℃条件下，特克塞尔种羊精子存活时间可达167h，而在77h之内存活率可达70%，因此该时间为可授配临界时间。常温15～25℃下绵羊精子存活时间约为72h而鲜精低温保存时间是167h比常温保存延长了95h。张培松等(2003)研究用维生素B12稀释小尾寒羊精液，然后在5～10℃下保存，发现维生素B12能显著提高精子的有效存活时间(精子活力高于0.6)和最长存活时间(90%精子死亡时间)，特别是以1:3比例稀释时，可以分别达到22h和49h，而不含维生素B12的稀释液有效存活时间和最长存活时间仅为7h和17h。但也有研究表明，与柠檬酸钠稀释液相比，维生素B12注射液用作波尔山羊精液低温(4～5℃)保存的精子存活时间相对较短，精子有效存活时间(活力降至0.3前的保存时间)和最长存活时间(99%精子死亡前的保存时间)平均为33h和64h，而含柠檬酸钠的稀释液可分别达到59h和102h。高维强(2012)研究用MES稀释液液态保存山羊精液，在15℃条件下，保存精子有效活力维持在50%以上。

4 肉羊鲜精液态保存技术的前景

当前我国种羊市场价格偏高，大多数小规模饲养的农户无力购买优质种羊，少量优质种羊集中在少数地方，偏僻的农村因交通等原因无法进行绵羊的配种改良，这已成为限制我国肉羊产业发展的一个瓶颈因素。而低温鲜精技术可保存精液77h内受胎率达65%以上，辐射半径达300km，通过遍布各乡形成网络的鲜精低温链，农民用低温保存的鲜精进行绵羊改良，总成本仅8～10元，这种低价而便捷的方式在实践中解决了农户绵羊改良难的问题。

鉴于绵羊冷冻精液人工授精的受胎率偏低，鲜精人工授精的辐射半径小，影响优秀种羊的利用率，利用现有繁改体系，建立以低温(0～4℃)保存鲜精的方法形成低温链，进行人工授精技术为主体的肉羊繁殖改良体系，可使农户避开购买价格昂贵的种羊，提高优秀种羊利用率与辐射范围，因此，推广适合我国国情的鲜精低温保存技术将极大地加速我国肉羊改良步伐，提高我国羊肉品质，提升我国肉羊产业化水平。

[1] 鲍志鸿, 赵玉民, 马惠海等. 引进肉羊鲜精低温存活时间的报道[J].中国草食动物, 2004,(s1): 74-75.

[2] 张德福, 刘东, 吴华丽. 家畜精液冷冻保存技术研究进展[J]. 国外畜牧学.猪与禽,2005(4): 28-30.

[3] 李助南. 不同稀释液对山羊精液的保存效果[J]. 湖北农学院学报, 2001(8): 217-218.

[4] 张培松, 周玉香, 徐振鑫.不同比例维生素B12稀释液对小尾寒羊精子存活时间的影响[J]. 黑龙江畜牧兽医, 2003,(8): 28-29.

[5] 杨凌. 羊精液冷冻保存技术研究进展[J]. 中国草食动物，2004，(1):49-51.

[6] 黄全成, 杨军祥, 张文举等. 咖啡因提高山羊精液冷冻效果试验[J]. 甘肃畜牧兽医, 1997, (1): 6-7.

[7] 徐刚毅, 张红平, 曾长军等. 波尔公羊的精液品质、保存稀释液和冷冻精液技术的研究[J]. 中国草食动物, 2002,(s1): 103-106.

[8] 刘长河. 不同保存方案对山羊精液液态保存的影响[D]. 泰安: 山东农业大学, 2010.

[9] 高维强. 用MES稀释液液态保存山羊精液果糖代谢的研究[D]. 泰安: 山东农业大学,2012.

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