陈 娟，王昌明，周 燕，黎红秀

（桂林医学院附属医院呼吸内科，广西桂林541001）

特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）是一组多种病因引起的以气道受损、炎症因子大量分泌、间充质细胞增生和细胞外基质异常沉积为特点的渐进性疾病，患者确诊后平均生存期仅3～5年［1］。IPF发病机制不明，近年来国内外研究表明肺泡上皮细胞-间质细胞转分化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）是肺纤维的重要机制之一，细胞因子转化生长因子-β1（transforming growth factor beta1，TGF-β1）可通过活化p38丝裂原活化蛋白激酶类（p38mitogen-activated protein kinases，p38MAPK）诱导 EMT 过程［2］。目前，对IPF尚缺乏有效的治疗方法，临床上常用糖皮质激素和免疫抑制剂，但效果并不满意。本课题组前期研究表明，青蒿素衍生物青蒿琥酯除抗疟疾外，还具有抗纤维化作用［3-4］。本研究用青蒿琥酯为工具药，研究在其干预下对TGF-β1诱导的EMT过程中的影响及其可能机制。

1 材料与方法

1.1 材料 永生化大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（rat lung epithelial-t-antigen negative，RLE-6TN）株购自中南大学湘雅实验中心细胞库。TGF-β1购自Peprotech公司（美国）；四甲基偶氮唑盐（MTT）粉剂购自sigma公司（美国）；Total RNA提取试剂、逆转录试剂盒购自TaKaRa宝生物工程大连有限公司；引物由Invitrogen公司设计合成；组织细胞裂解液（tissue and cell lysis solution，WIP）、BCA蛋白浓度测定试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司；p38MAPK兔抗人一抗购自Santa cruz（美国）；α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）兔抗人单克隆抗体购自ABBIOTEC公司（美国）；V-波形蛋白（vimentin，Vim）兔抗人一抗购自Bioworld Technology；辣根酶标记山羊抗兔IgG购自中杉金桥；胎牛血清购自GIBCO公司；1640培养基购自HyClone公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 RLE-6TN细胞在37℃、5%CO2、饱和湿度的条件下用含10%胎牛血清的1640培养基培养。稳定传代后用含1%胎牛血清的……