LAMP技术在肺部非典型感染病原体检测中的应用*
2013-03-04杨俊发柴晓宇
杨俊发,柴晓宇,许 飞
(1.南昌大学医学院,南昌330006;2.南昌大学第一附属医院呼吸内科,南昌330006)
非典型肺部感染以呼吸道为主要感染途径,病原体以肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)、肺炎衣原体(chlamydia pneumoniae,CP)、嗜肺军团菌(legionella pneumophila,LP)为主,临床表现可为轻、重不等的感染症状,特别是并发重症肺炎,预后差[1]。及早明确引起非典型肺部感染的病原菌,对临床医生制订诊治决策、指导针对性用药起重要作用。但现阶段临床上对这几种病原体的检测还处于相对滞后的局面[2],所以,开发一套可以快速准确检测这3种病原体的方法是临床检测工作中亟待解决的问题。
环介导等温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)[3-4]具有简便、经济、灵敏度及特异性好等优点,近年来发展迅速,已被广泛应用于核酸扩增领域。病原微生物基因组计划的进展,使基因诊断病原微生物感染成为可能,基因芯片杂交技术是在此基础上新兴的一种高通量技术,即在面积较小的载体上实现对多种目标基因的同时检测[5]。本研究拟采用LAMP技术对引起非典型肺部感染的3种常见病原体的特异基因片段进行扩增,并结合基因芯片杂交技术实现对病原体的检测,以求开发一套可以快速检测非典型肺部感染的病原体的方法。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌种标准DNA来源 嗜肺军团菌DNA获赠于北京基因组研究所,肺炎支原体及肺炎衣原体DNA为本实验室保存品。
1.1.2 标本来源 筛选2009年3月至2010年9月在南昌大学第一附属医院呼吸内科、江西省儿童医院等医院门诊就诊及住院的疑似肺部感染者,根据临床相关诊断和排除标准,选取非典型肺部感染及重症肺炎患者为标本来源,标本为痰、血配对标本,共110份,编号后在适宜温度下保存。……
