罗永慧，吴昌志，舒向荣

(江西省妇幼保健院,江西南昌330008)

血培养阳性标本直接细菌鉴定和药敏试验的评价

罗永慧，吴昌志，舒向荣

(江西省妇幼保健院,江西南昌330008)

目的比较直接法与常规法对血培养阳性标本进行细菌鉴定及药敏试验的一致性，探讨直接法菌种鉴定及药敏试验的可行性。方法将血培养仪报警的阳性标本涂片革兰染色镜检,依据染色结果选择不同鉴定卡，直接上机进行菌种鉴定及药敏试验,同时将阳性标本转种平板分离培养,分纯后的菌落按常规法上机鉴定及药敏试验,并对两种方法检测结果进行比较。结果两种方法细菌鉴定总一致率为93.5%，其中G-菌鉴定一致率为95.4%，G+球菌一致率90.9%;药敏试验总符合率达94.6%。结论直接法菌种鉴定及药敏试验明显缩短了检测时间,且与常规法检测结果符合率高，为临床尽早抗感染治疗提供了重要依据。

细菌学技术；血培养；直接法；药物敏感试验

菌血症和败血症是临床严重危及患者生命的疾病，因此快速准确的细菌鉴定与药敏试验是临床诊断和治疗的关键。为了使临床尽快地得到有效且合理的抗菌药敏结果，我们从全自动血培养仪报警的阳性标本中抽取菌液，直接上全自动微生物分析仪检测，同时与阳性标本按常规方法分离菌株，再上机检测的结果进行比较，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源选取2012年6月至2013年6月本院发热伴感染的住院患者的血培养阳性标本396例，同一患者多次分离的菌株不重复记入，含有复合菌的血培养阳性标本不记入。

1.2 仪器与试剂BACTEC9120型全自动血培养仪、标准树脂血培养瓶均为美国BD公司生产；MicroScan WA96全自动微生物分析仪、G-菌鉴定及药敏复合板(NC50)、G+菌鉴定及药敏复合板(PC33)为美国Dade Behring公司产品。分离用血平板、中国蓝平板、巧克力平板为OXOID公司产品。质控菌株：金黄色葡萄球菌ATCC29213，大肠埃希菌ATCC25922，铜绿假单胞菌ATCC27853。

1.3 方法将BACTEC 9120型血培养仪报警的血培养阳性标本，用无菌注射器抽取阳性瓶中菌液涂片、行革兰染色镜检,根据涂片染色结果,取菌液5～10μl,混匀于专用接种水中,接种于专用鉴定板上，直接上机做细菌鉴定和药敏试验。同时转种血平板、中国蓝平板、巧克力平板(巧克力平板置于5 %CO2环境中),经18～24h形成菌落后再行涂片革兰染色,根据氧化酶和触酶试验初筛,常规上机进行细菌鉴定及药敏试验,并对二者的结果进行比较。

2 结果

2.1 菌株鉴定结果符合率396份血培养阳性标本中,常规法鉴定出细菌385株，其中革兰阴性杆菌221株、革兰阳性球菌164株，另有11株为革兰阳性杆菌、念珠菌或两种方法都没能鉴定出来的细菌。而直接法与常规法鉴定相符的革兰阴性杆菌211株、革兰阳性球菌149株；两种方法细菌鉴定革兰阴性杆菌一致率为95.4%(211/221)、革兰阳性球菌一致率为90.9%(149/164)、总一致率为93.5% (360/385)，详见表1。

表1 血培养阳性标本直接上机与转种菌落上机鉴定结果比较

2.2 药敏结果符合率将385株细菌药敏试验结果进行比较,药敏结果直接法与常规法符合率高，总一致率为94.6%，详见表2。其中非发酵菌有2株，链球菌有5株，两种方法都没有药敏结果。

表2 直接法与常规法对385株菌药敏试验结果的符合率

3 讨论

血培养是菌血症、败血症临床诊断和治疗的关键[1]。虽然大多数医院应用全自动血培养系统,提高了血培养阳性率,但是对血培养阳性标本进行快速准确的菌种鉴定和药敏试验,依旧是微生物工作者亟待解决的问题[2-4]。

血培养阳性标本按常规法进行细菌鉴定和药敏试验,往往需要2～3d。明确病原菌、早期诊断、早期正确治疗，是菌血症治疗成功的关健。我们采用的阳性瓶肉汤直接法较传统法至少提前1d，且与传统法比较对396例血培养阳性标本细菌鉴定结果为菌种鉴定阴性杆菌一致率为95.4%、阳性球菌一致率为90.9%、总一致率为93.5%，与有关资料相符[5]，但高于李慧[6]所报道的两种方法菌种鉴定总一致率83.7%的结果。结果表明对肠杆菌科的鉴定一致率较高，对非发酵菌和链球菌的鉴定一致率相对较低。这可能与细菌本身培养环境要求较高,在鉴定板中生长缓慢或不充分有关；血培养液中微量的血液细胞和纤维成分等也可能影响了测试板的生化反应结果。

相对于菌种鉴定结果，临床医生更想尽早知道药敏结果。我们在比较血培养阳性标本细菌鉴定一致性的同时,还对两种方法药敏检测结果的符合率进行了比较，发现两者的符合率达94.6%。按照相关要求，一种新方法的建立应与参考方法进行比较，其符合率应≥90.0%。结果表明对阳性血培养标本采用直接法药敏试验，可以获得较为满意的检测结果。

我们利用直接法省略了常规法中的细菌分离培养步骤,所需时间缩短。因此直接法克服了常规法费时的缺点，对于及早确定病原菌和药敏结果，为临床选择用药提供了及时有效的依据，避免了经验用药，对提高菌血症、败血症等感染性疾病的治愈率具有重要的意义。

[1]谢服役.血培养标本病原菌分布及耐药性分析[J].中华医院感染学杂志,2013,23(1):222-224.

[2]吴绍莲,胡辛兰,池春燕.血培养常见病原菌的变迁和耐药性分析[J].实验与检验医学,2013,31(2):138-140.

[3]乔亚峰,叶振东,张国雄,等.血培养常见病原菌的分布及耐药性分析[J].实验与检验医学,2011,29(2):136-137.

[4]张鸿.武汉市青山区血培养病原菌的分布及耐药性分析[J].实验与检验医学,2011,29(4):411-412.

[5]漆坚.全自动细菌鉴定仪对血培养阳性标本直接鉴定及药敏试验比较[J].国际检验医学杂志,2006,27(5):397-398.

[6]李慧.两种细菌鉴定法在临床血液检验中的应用[J].现代预防医学,2011,38(9):1705-1706.

R446.5,Q939.92,R631+.3,R515.3

A

1674-1129(2013)05-0450-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.017

罗永慧，男，1973年11月出生，汉族，毕业于中南大学湘雅医学院，硕士学位，专业病原生物学，主要研究方向为临床微生物。