LC-MS/MS法测定蔬菜和水果中3种杀软体动物剂

2013-01-30郑新华韩焕美何桂华陈晞张爱霞卢燕华

食品研究与开发 2013年22期

郑新华，韩焕美，何桂华，陈晞，张爱霞，卢燕华

（济南出入境检验检疫局，山东济南250014）

防治有害软体动物的农药叫做杀软体动物剂。杀虫环、灭梭威、四聚乙醛是选择性很强的软体动物杀灭剂，广泛应用于防治作物上的田螺、蜗牛与蛞蝓等害虫[1]。虽然此类药物毒性中等或较低，但由于广泛使用，导致人畜中毒的事例时有发生[2]，同时，此类药物可在农作物、环境及水生生物大量残留，最终威胁人类健康。我国GB2763-2012《食品中农药最大残留限量》规定了叶菜中的四聚乙醛残留限量是1.0 mg/kg；糙米中的四聚乙醛残留限量是0.2 mg/kg；大米中的杀虫环为0.2 mg/kg。杀虫环在日本肯定列表中限量为0.050 mg/kg。

目前，关于杀软体动物剂残留量检测报道较少。有用气相色谱法（GC-ECD）检测杀虫环的报道[3]；有用LC-MS/MS 检测灭梭威的报道[4]；用气相色谱法[5]和LCMS/MS 法[6]检测的四聚乙醛的报道。但对于本文所述的3 中不同类型的杀软体动物剂残留量同时分离检测的尚未见报道。本文对3 中不同类型的杀软体动物剂在蔬菜和水果中的残留量采用同时提取、净化方法，建立了LC-MS/MS 同时检测的方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Aglient1200 高效液相色谱API4000 串联质谱仪：美国AB SCIEX；感量为0.1 mg 的分析天平：瑞士梅特勒公司；Milli-Q 纯水器：美国Millipore 公司；IKAGM200 型高速均质器：德国IK 公司；超纯水由Milli-Q纯水器制备；甲醇、乙腈、丙酮：色谱纯，默克公司；甲苯、甲酸（分析纯）；氯化钠、无水NaSO4（分析纯，用前在500 ℃马弗炉内烘5 h，冷却装瓶备用）；四聚乙醛、灭梭威、杀虫环标准品：德国Dr Ehrenstorfer 公司。其他试剂，如非特别提及，均为分析纯。

1.2 标准工作液的配制

称取四聚乙醛，灭梭威、杀虫环标准品各10.0 mg，用甲醇溶解后，并分别定容于100 mL 棕色容量瓶中，即得100 mg/L 标准储备液。用甲醇将标准储备液稀释成系列标准工作溶液，进行LC-MS/MS 分析。以标准工作液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制相关线性方程。

1.3 样品提取及净化

称取20.0 g 样品于50 mL 聚四氟乙烯离心管中，加入20 mL 乙腈，在匀浆机中高速匀浆2 min。匀浆后以4 500 r/min 离心5 min，上清液转移至另一装有5.0 g氯化钠的50 mL 离心管中，塞上塞子，手动剧烈振摇后再涡流1 min，再以4 500 r/min 离心5 min，吸取上清液转移于装有5.0 g 无水NaSO4的漏斗中，漏斗下接10 mL刻度试管，准确接液10 mL 于刻度管中，刻度管置于40 ℃水浴中氮气吹干。准确加入2.0 mL 乙腈溶解残渣涡流2 min 待净化。

待净化液转移至盛有0.15 gPSA 粉和0.15 gC18粉的离心管中。涡流2 min，离心。取1.0 mL 上清液，置于离心管中氮气吹近干，用甲醇定容至1.0 mL，涡流混合后过0.22 μm 滤膜，进行LC-MS/MS 分析。

1.4 仪器条件

色谱条件：XBridgeTMC18色谱柱（150 mm×2.1 mm×5.0 μm）；进样量：10 μL；柱温：30 ℃。流动相：甲醇+0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱程序见表1。

表1 流动相梯度洗脱条件Table 1 Eluted condition of the mobile phase

质谱条件：ESI 源正离子模式电离；多反应监测；电喷雾电压：4 500 V；离子源温度：500 ℃；载气流速：15 L/min；雾化器压力：45 psi。目标物标准品的采集参数见表2。

表2 3 种杀软体动物剂的LC-MS/MS 分析参数Table 2 LC-MS/MS parameters for three kinds of molluscicides

1.5 添加回收实验

对菠菜、白菜、草莓和白瓜进行添加回收实验，分别添加浓度为0.010、0.020、0.050 mg/kg。称样后加入标准溶液，涡旋混匀放置0.5 h 后按上文进行样品处理。

2 结果与讨论

2.1 流动相的选择及优化

以乙腈+0.1%甲酸水，甲醇+5 mmol/L 乙酸铵水溶液，甲醇+0.1%甲酸水作为流动相，考察了不同流动相对色谱图的影响。研究发现以乙腈+0.1%甲酸水，甲醇+5 mmol/L 乙酸铵水溶液为流动相，四聚乙醛，杀虫环出峰快，峰形差。而以甲醇+0.1%甲酸水为流动相，采用梯度洗脱，3 种杀软体动物剂能够快速分离，且每种化合物色谱峰对称尖锐，分离效果较好，见图1。因此，选择甲醇+0.1%甲酸水溶液作流动相，梯度洗脱条件见表1。

图1 3 种杀软体动物剂多反应监测色谱图Fig.1 Multiple reaction monitering chromatograms of three molluscicides

2.2 净化条件的选择

实验比较了分散固相净化方法、氨基柱、弗罗里硅土小柱对样品的净化效果。结果表明弗罗里硅土小柱去除杂质效果较差；氨基柱去除杂质效果较好，但试剂消耗量大、费时，而且四聚乙醛回收较差。采用PSA 粉、C18粉2 种混合吸附剂粉末净化样品，提取液可以充分和净化粉末接触，净化效果较好，并且基线稳定，回收效果好。

2.3 样品机制效应的消除

样品基质对离子化有抑制作用，不同农药受同一样品基质影响不同，不同样品对同一农药离子化的抑制也有差异。杀虫环和灭梭威的离子化效率受样品基质影响较小，四聚乙醛离子化效率受样品基质影响较强。菠菜，白菜对农药离子化影响较弱，草莓和白瓜对农药离子化影响较强。为消除样品基质效应，以空白样品提取液为标准溶液的稀释液，可使标样和样品溶液具有同样的离子化条件，从而消除样品基质效应。