张忠强 吴 涛 于红涛 何锦照

（河源市人民医院内二区，广东 河源 517000）

急性白血病患者体内MicroRNA-143在骨髓细胞中的表达及其意义分析

张忠强 吴 涛 于红涛 何锦照

（河源市人民医院内二区，广东 河源 517000）

目的探讨MicroRNA-143在急性白血病患者骨髓细胞表达情况，并分析其临床意义。方法入选2009年5月至2011年9月在我院住院治疗的急性白血病患者47例，同时入选在我住院治疗并进行骨髓穿刺检查的非白血病患者46例作为对照组，比较两组患者MicroRNA-143表达情况，以及白血病组患者经治疗后MicroRNA-143表达变化情况。结果白血病组患者其MicroRNA-143表达水平显著低于对照组患者，差异均具有显著的统计学意义，P＜0.05；且MicroRNA-143表达水平在白血病患者不同年龄、性别、疾病分型、基因类型等方面的差异无明显差异，P＞0.05；入选白血病患者经化治疗后MicroRNA-143表达水平较治疗前水平显著升高，差异具有显著的统计学意义，P＜0.05。结论MicroRNA-143表达与急性白血病发病的发生、发展存在非常显著的关系，检测其水平的变化可以对患者的预后做出有效的评价。

急性白血病；骨髓细胞；表达；临床意义；MicroRNA-143

近年来，随着社会发展，白血病患病率呈现逐渐上升的趋势，成为威胁人类健康和生命安全的主要疾病之一。急性白血病是一类由于干细胞出现异常克隆的恶性疾病，其中克隆中的干细胞失去进一步分化成熟能力而停滞在细胞发育不同阶段；并且在发展过程中不断浸润器官和其他组织，抑制造血系统，对患者造成严重的危害[1]。及早诊断并干预这类疾病对于挽救患者生命具有非常重要的临床意义。MicroRNA是近年来研究较多的一种小RNA，为一种内生的、长度约20～24个核苷酸组成，在细胞内发挥着多种重要的调节作用，研究显示，每个MicroRNA可以拥有多个靶基因，且多个MicroRNA也可以对同一个基因发挥重要的调节作用；MicroRNA对人类基因也存在重要的调节作用，大约控制人类1/3的基因[2-3]。随着研究的深入，人们发现MicroRNA与肿瘤的发生存在密切关系，通过调控细胞分化和增殖直接参与肿瘤的发生、发展[4]，本研究旨在探讨MicroRNA-143在急性白血病患者骨髓细胞表达情况，并分析其临床意义。

1 资料与方法

1.1 资料

入选2009年5月至2011年9月在我院住院治疗的急性白血病患者47例，其中男性患者29例，女性患者18例，患者年龄18～57岁，其中髓系白血病患者27例，占57.4%；淋巴系白血病20例，占42.6%；所有患者均符合FAB分型诊断标准，均为初次诊断的白血病，均未接受化疗或其他治疗。同时入选在我住院治疗并进行骨髓穿刺检查的非白血病患者46例作为对照组，两组患者均签署知情同意书，两组患者在年龄、性别等其他方面的差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 标本处理

所有入选者在进行骨髓穿刺后，留取骨髓标本5mL，采用肝素抗凝；单个核细胞提取，采用TRIzol法提取RNA，然后吸取2μLRNA在核蛋白定量测定仪上测定OD值，进行准确定量。反转录严格按照试剂盒说明书进行。

1.2.2 实时定量PCR

引物设计与合成由专门的生物科技公司负责设计和合成，MicroRNA-143实时定量反应总体系的构建，总量为20μL，包括：10μLSYBR Green 1μL、cDNA10μmol/L、正向和反向引物各1μL、ROX参考资料0.04μL、DEPC水补充至20μL，循环参数主要见参考文献[5]，分为四个阶段进行：第1阶段，50度2min钟；第2阶段，95℃2min，以上两个阶段均进行1各循环；第3阶段，95℃15s，60℃30s，40 个循环；溶解曲线分析: 95℃15 s、60℃1min、95℃15s、60℃15s、1个循环。每个标本均作复孔3管，至少重复3 次。

1.2.3 观察指标

比较两组患者MicroRNA-143表达情况，以及经治疗后，白血病患者MicroRNA-143表达变化情况。

1.3 统计学处理

采用spss17.0软件进行统计分析，计量资料采用均数±标准差(χ—±s)表示，2组间资料比较采用t检验；计数资料用百分比表示，采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组人群MicroRNA-143表达情况比较

分析显示，白血病组患者其MicroRNA-143表达水平显著低于对照组患者，差异均具有显著的统计学意义，P＜0.05；且MicroRNA-143表达水平在白血病患者不同年龄、性别、疾病分型、基因类型等方面的差异无明显差异，P＞0.05。

2.2 不同阶段MicroRNA-143表达情况比较

入选白血病患者经化治疗后，再次检测患者MicroRNA-143表达水平较治疗前水平显著升高，差异具有显著的统计学意义，P＜0.05。

3 讨 论

随着环境污染加剧，白血病发病率呈现显著上升的趋势，尽管近年来在治疗急性白血病取得了巨大的进步。白血病仍然是威胁人类健康和生命安全的主要疾病之一，早期诊断，并采取有效地治疗手段对于改善白血病患者的预后具有非常显著的临床意义[6]。生物学技术的进展给医学的发展提供了非常有利的临床工具，实时定量PCR技术的出现是DNA定量检测非常有效的手段，具有灵敏度高、特异性强、自动化程度高等优点，因而被广泛应用于临床诊断、基础研究[7]。在本研究中采用Q-PCR技术取得了非常好的效果。MicroRNA为小分子非编码RNA，广泛存在于真核生物中，其与靶基因结合的方式主要为碱基配对，对靶基因产生负性调控作用，主要的生物学特点为在序列上高度保守，表达上具有发育阶段性和组织特异性[8]。是近年来临床研究和基础研究的热点问题，随着研究的逐渐深入，人们发现其与多种肿瘤的发生、发展存在非常显著的关系，如肝癌、乳腺癌等。其表达具有一定的组织特异性，因此可以通过检测患者细胞表达水平对患者疾病特点、预后做出非常有价值的评价[9]。

在本研究中通过比较发现，白血病患者MicroRNA-143表达水平显著下调，与患者年龄、性别、疾病分型等无显著相关性，并且经治疗后其表达水平呈现上升趋势，研究证实了MicroRNA参与了白血病发生、发展整个过程。有研究表明，MicroRNA-143具有抑癌基因作用，并且已经证实其在多种肿瘤中均发挥着非常显著的作用，可以显著抑制癌细胞的增殖和迁移，发挥作用的主要机制为作用于KRAS基因抑制蛋白激酶通路，并且增强部分化疗药物的化疗敏感性，MicroRNA-143在白血病患者中的作用是多方面的。MicroRNA-143这种作用不仅在白血病患者中得到了有效地证实，并且在其他肿瘤中也得到了类似的结果，如胃癌、淋巴瘤等其表达水平均出现明显异常。随着生物学研究进展，其信息数据表明，每个MicroRNA对于数百个目标基因具有一定的控制作用，其在血液系统中的研究最先与血细胞的分化开始的。多项研究结果表明，MicroRNA突变或功能失调参与了白血病的发生、发展，因此在白血病患者检测MicroRNA表达水平及其变化情况对于白血病的基因诊断、预后判断、靶向治疗等方面具有非常重要的作用[10]。

综上所述，随着研究的进展，白血病的发生、发展是多种基因共同参与的结果；MicroRNA突变或功能失调参与了白血病的发生、发展，检测其水平的变化可以对患者的诊断、预后做出有效的评价。

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1671-8194（2013）11-0255-02