解冰辉

（河北省畜牧良种工作站，河北石家庄 050061）

种猪精液质量的控制与检测

解冰辉

（河北省畜牧良种工作站，河北石家庄 050061）

在实施人工授精之前，对种猪精液质量的控制和检测尤为重要，将直接影响母猪的受精率。本文重点介绍了原精的检测、稀释与分装，常温精液的检测及保存注意事项。

种猪精液；检测；精子活力；畸形率

种猪精液的生物学特性和母猪的受精率密切相关，所以在实施人工授精之前，对精液质量的控制和检测很重要。

1 原精的检测

在公猪站对种猪采精后，首先应对原精的以下方面进行检测。

1.1 外观

原精呈乳白色，略带腥味，无脓性分泌物和皮毛等异物。如果呈现淡黄色，可能因为较长时间未采精；如果有脓性分泌物，怀疑种猪的健康出现问题；如果有异味或臭味，可能是包皮内有积液或精液被尿液污染所致。

1.2 采精量

采精量应≥100 mL，方为合格。

1.3 精子密度

有条件的公猪站可以用专用的密度仪对精子密度进行测定，也可用血细胞计数板进行计数。按照国家相关标准规定，种猪常温精液的精子密度应≥1亿/mL，否则为不合格。

1.4 精子活力

取一滴原精滴于载玻片上，在36～38℃、低倍镜下观察，活力≥70%为合格。

2 原精的稀释与分装

按照原精密度测算出稀释倍数，稀释倍数=（采精量×密度×活力）/每剂量规定的直线前进运动精子数，稀释液加入量=稀释倍数×剂量-采精量。稀释时应该注意：1）采集的原精应及时稀释，以免活力降低；2）等温稀释：原精和稀释液的温差应控制在1℃以内，根据原精的温度调整稀释液的温度；3）分2～3次稀释，每次稀释静置30秒后再进行下一次稀释；4）稀释时，将稀释液沿杯壁缓慢加入，边加边沿一个方向轻轻摇动或搅拌，使其混合均匀；5）稀释完毕静置5分钟后，检测活力，≥60%则进行分装，达不到则应废弃。

精液分装时应注意瓶内或袋内不能存留空气，要求保存温度为17℃，每隔4～8小时轻轻翻动一次。

3 常温精液的检测

3.1 种猪常温精液的国家标准

关于种猪常温精液的国家标准要求如下：1）外观：乳白色，无杂质，包装封口严密。2）剂量：地方品种为40～50 mL，其他为 80～100 mL。3）精子活力：≥60%。4）每剂量中直线前进运动精子数：地方品种≥10亿，其他≥25亿。5）精子畸形率≤20%。6）有效期≥72小时。

3.2 常温精液的检测

3.2.1 标识

首先产品标识上应该标明猪号、品种、采精具体时间、生产单位等。如果是项目产品，还应有“全国生猪良种项目”标识。不能只用碳素笔在瓶子上标记猪号。精液的外观检测同原精。

3.2.2 剂量

取同一头猪的两瓶精液，轻轻沿瓶壁倒入量筒内，尽量减少气泡的产生。将量筒放于工作台上进行标准读数，平均每瓶≥80 mL方为合格。应注意：很多精液瓶的刻度并不准确，精液量往往达不到80 mL。

3.2.3 精子活力

将两个剂量的常温精液轻轻摇动均匀，分别取25 μL精液于预热的载玻片上并加盖玻片，在37℃条件下，用显微镜（200～400倍）观察精子活动情况，每个样片观察3个视野，计算平均值，精子活力≥60%为合格。有条件的最好使用相差显微镜。

检测精子活力需快速准确，要在第一时间判断直线前进运动的精子数是否在一半以上，进而再观察是否达到60%、70%、80%等。如果精子活力＜60%，就需多看几张样片，多做几次重复试验，以避免其他因素造成的活力低下。例如，环境温度会影响精子活力，温度偏低则精子的活跃程度降低；检测精子活力的时间一般控制在1～2分钟内，时间过长，精子可能会部分甚至全部死亡。

3.2.4 每剂量中直线前进运动的精子数

取50 μL精液和3.0%的氯化钠溶液0.95 mL混匀，将血盖片盖在血球计数板的计数室上，用移液器吸取适量混合好的液体，滴在血盖片边缘，使稀释后的精液慢慢自行流入计数室，均匀充满，不允许有气泡产生或厚度过大，放置5分钟后，在显微镜下观察计数，每个计数室观察左上角、左下角、右上角、右下角和中间共5个方格，累计5个方格中所有的精子数；计数原则：计上不计下，计左不计右。每剂量中直线前进运动的精子数=5个方格精子数× 100万×剂量值×活力。每个样品应观察两个计数室，用平均值表示结果，如两个计数室计数误差大于5%则应重检。使用血球计数板前，不能用刷子清洗，防止划伤格线导致显微镜下的视野模糊不清。

3.2.5 精子畸形率

1）抹片：在载玻片A一面的一端标明猪号，取一滴精液滴于载玻片A的另一面的一端，用边缘光滑的载玻片B的一端与有样品的载玻片A边缘呈约35°夹角，将样品均匀分布于载玻片B一端，然后用载玻片B拖着样品走向载玻片A的另一端，自然风干15分钟。每个样品制作2个抹片。

2）固定：在风干的抹片上滴1～2 mL中性福尔马林固定液，15分钟后用清水缓缓冲去固定液，自然风干或冷风吹干。

3）染色：固定好的抹片反扣在带有平槽的有机玻璃面上，把姬姆萨染液滴于槽与抹片之间，让其充满平槽并与抹片充分接触，1.5小时后用水缓缓冲去染液，晾干待检。

4）镜检：不能使用相差显微镜，载物台不能加热。在显微镜下400倍观察制备好的抹片，每个抹片分左右两个区，共观察200个精子，取两片平均值，两片畸形率差值大于6则重做。精子畸形基本分为以下三类：a类是头部畸形，即窄头、梨形头、圆头、巨头、小头、双头和顶部脱落等；b类是尾部畸形，即带有原生质滴、单卷尾、多重卷尾、环形卷尾和双尾等；c类是中段畸形，即颈部肿胀、中段纤丝裸露、中段呈螺旋状等。

3.2.6 常温精液的有效期及其保存注意事项

国家标准规定常温精液的有效期应超过72小时，这就要求使用的稀释液或稀释粉是中效或长效的。生产常温精液要注意：精液中应没有杂质，如有杂质，精子容易因聚集、粘连而死亡；精液温度要逐渐降低至17℃，要用毛巾或塑料袋把分装好的精液包好置于泡沫箱内，然后再放在17℃恒温箱里保存，如果把刚分装好的精液直接放入17℃恒温箱中，对精子损伤非常大；保存时温差不应超上下1℃，每隔4～8小时应翻动一次。

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2013-11-26