李光伟， 李 波， 康美佳， 徐斐翔， 邢文婧， 徐长庆，4△

(1齐齐哈尔医学院病理生理教研室，黑龙江 齐齐哈尔161006;2哈尔滨医科大学病理生理教研室，黑龙江 哈尔滨150086;3齐齐哈尔市第一医院胸心外科，黑龙江 齐齐哈尔161006;4黑龙江生物医药工程重点实验室，黑龙江 哈尔滨150081)

肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension，PAH)被称为“心血管系统的恶性肿瘤”，其临床症状不典型，误诊率高，一旦丧失早期诊断和治疗的机会，大部分患者将在2 ～3 年内死于心力衰竭［1］。慢性阻塞性肺疾病在我国北方地区十分常见，最终发展成肺源性心脏病，严重影响人们的健康和生存质量。肺动脉高压是导致肺心病的重要机制，因此，肺动脉高压和肺心病的早期诊断和有效防治具有重要的临床意义。但是，肺动脉高压的发生机制迄今尚未完全阐明，需要从新的视角加以探讨。我们以前的研究证实，在大鼠肺动脉平滑肌细胞中有钙敏感受体(calcium－sensing receptor，CaSR)的表达，并且缺氧能够活化CaSR 导致肺动脉平滑肌细胞增殖，促进肺动脉重构［2－3］。其具体的机制如何，CaSR 通过什么信号途径引起肺动脉重构，国内外鲜有报道。本实验将对上述问题展开研究。

材 料 和 方 法

1 材料

1.1 主要试剂 Cyclin D1、protein kinase B (Akt)、p－AktⅠ抗及Ⅱ抗均购自Santa Cruz，细胞周期试剂盒购自Becton Dickinson，BrdU 购自Roche Applied Science，Ⅱ型胶原酶购自Sigma。

1.2 仪器 Beckman 低温离心机;立体显微镜(Nikon);细胞缺氧培养箱和酶标仪(Thermo)。

2 方法

2.1 肺动脉分离和平滑肌细胞培养 肺动脉分离和平滑肌细胞提取、培养参照文献［4］。在立体显微镜下分离大鼠肺动脉，采用Ⅱ型胶原酶消化法提取原代平滑肌细胞，第3 ～5 代生长状态良好的细胞用于实验。……