李延荣 陈 伟，2

(1 新疆兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室，新疆阿拉尔 843300)

(2 新疆兵团塔里木畜牧科技重点实验室/塔里木大学动物科学学院，新疆阿拉尔 843300)

奶牛乳腺炎是危害奶牛业发展的重要疾病之一，流行病学调查表明使用抗生素治疗其治愈率在0～80%之间不等，其中最难治疗的是由金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)引起的感染。而近年来的研究表明［1］，金黄色葡萄球菌形成的生物膜具有高度的耐药性并能逃避免疫系统的攻击，其感染易慢性化并难于控制。因此研究奶牛乳腺炎的病原菌之一——金黄色葡萄球菌生物膜形成状况及机制尤为重要。本研究检测了分离自本地区奶牛场的金黄色葡萄球菌其生物膜形成状况以及可能在生物膜形成的不同阶段发挥作用的相关基因的分布情况，为该地区金黄色葡萄球菌感染引起的奶牛乳腺炎防制提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验仪器

PCR仪(Bio－Rad)、移液枪(Eppendorf)、恒温培养箱(上海)、水浴锅(金怡)、96孔板(Labphil Biotechnology)、电热恒温干燥箱(DHG－9031A)等。

1.2 实验药品

胰蛋白胨大豆肉汤(TSB培养基，BactoTM)、PCR相关试剂均购自东盛生物公司，实验所用引物均由上海生工生物工程有限公司合成。

1.3 实验菌株

表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)ATCC35984(BF+)由上海复旦大学医学院赠送，其它实验菌株均为本实验室分离鉴定所得。

1.4 金黄色葡萄球菌生物膜形成能力的检测

根据任晓镤等［2］的方法，即将富集培养过夜的菌液按1:100比例吸取20 μL菌液接种至2 mL TSB液体培养基中，振荡混匀后，吸取200 μL至96孔细胞培养板中，每个实验菌株接种4孔，同时设立阳性对照(ATCC 35984)及空白对照(不加菌液的TSB培养基)各4孔。……