董立伟，张江英 （摘译）

（扬州大学兽医学院，江苏 扬州 225009）

1 材料和方法

1.1 细菌株 用于免疫的菌株为F18ac+非产肠毒素大肠杆菌疫苗候选株 2134（O157∶K119∶F18ac），攻毒使用 11-800/1/94 F4ac+ETEC 株（O149∶K91∶F4ac∶987P∶Hly+LT+STb+）。疫苗候选株通过特殊培养程序减毒。

1.2 单克隆抗体 详见表1。

表1 用于在免疫组织学上显示猪小肠内淋巴样和髓样细胞亚群的猪白细胞CD/SWC抗原特异性单抗

1.3 猪种及试验设计 试验所用猪只为15只杂交猪（瑞典长白×约克夏），未接种疫苗的对照组猪在第0d注射生理盐水，而试验猪连续 3 d（-2，-1，0）肌内注射2.5mg/kg免疫刺激剂量的左旋咪唑，或在连续3d（-2，-1，0）给予左旋咪唑的基础上，在第0d通过灌胃接种60mL于TSB内培养的1010CFU/mL F18ac＋非ETEC疫苗候选株2143。7d后，用1010CFU/mL的F4ac＋ETEC株11-800/1/94感染所有试验猪。第13d，在每组中选取3头猪施行安乐死，并进行免疫组织学取样。

1.4 从粪便中分离疫苗株及攻毒株 在注射左旋咪唑前2d开始以直肠拭子对每头猪在疫苗接种和攻毒后第0d、第7d和13d进行采样。

1.5 取样 每组猪中都观测到了腹泻现象（尽管强度、持续时间不同，且发生在每组不同编号的猪上），我们按照如下标准在每组挑选3头猪施行安乐死并取样：①腹泻的有无（＋或-）；②腹泻的程度（轻度为＋，中度为＋＋，＋＋＋为严重）。

1.6 免疫组化染色 施行安乐死后，其回肠和空肠的样本用生物素-抗生物素复合物（ABC）法进行染色。将鼠抗猪CD抗原特异性单抗（见表1）滴加在切片上并在室温下培养1h。二抗采用生物素化的兔抗鼠IgG。采用标准免疫组织学技术脱水并封片。

1.7 形态测定 利用数字图像分析（DIA）软件程序Lucia G定量计数空肠、回肠黏膜内淋巴样和髓样细胞亚群的免疫表型。……