刘 声，孙桂芝，雷 娜

(1.中国中医科学院广安门医院肿瘤科，北京 100053;2.山西中医学院中医系，太原 030024;3.北京振东光明药物研究院有限公司，北京 100120)

肿瘤的发生、发展与机体的免疫状态密切相关。近年来的国内外研究表明［1，2］，机体的炎性微环境在肿瘤转移中发挥着重要作用，并与调节性T细胞(regulatory T cells，Treg)和辅助性 T细胞 17(T helper 17 cells，Th17)的表达与功能密切相关。在特定条件下，Treg细胞与Th17细胞受炎性细胞因子的影响会发生相互转化，调控Treg/Th17之间的平衡是逆转肿瘤转移过程中炎性内环境的关键环节。本文将探讨活血及益气活血中药代表苏木、苏木+黄芪对 Lewis肺癌荷瘤小鼠脾Th17、Treg细胞平衡及其相互间转化的转录分子的干预作用，为中药逆转肿瘤免疫逃逸提供实验依据。

1 材料

1.1 药物

黄芪、苏木浸膏由中国中医科学院广安门医院制剂中心提供，并由中药煎制机煎制成原液，生药含量为70.7%;准确量取原液，隔水加热蒸发浓缩而制成中药浸膏(含生药 2.1g·ml－1，生产批号20071121)。

1.2 动物

C57BL/6雄性小鼠，6～8周龄，体质量20g±2g，清洁级，由中国医学科学院实验动物研究所提供(许可证号 SCXK-11-00-0006)，中国中医科学院广安门医院动物室喂养。Lewis肺癌荷瘤鼠由中国医学科学院药物研究所提供(许可证号 SYXK(京)2011-0001)。

1.3 试剂

FITC anti-mouseCD4、PE anti-mouse CD25、PEcy5 anti-mouse Foxp3、PE anti-mouse IL-17、CD4+CD25+Regulatory T cell Isolation Kit、LD、MSColumns(Miltenyi Biotic)、RevertiAidTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit(Fermentas)，SYBR Green I Master Mix(Applied Biosystems)，引物由北京赛百盛生物技术公司合成。

1.4 仪器

FACS Calibur Flow Cytometer System(BD)，SM800解剖显微镜(Nikon)，VarioMACS磁性细胞分选仪(Miltenyi)，ABI7500荧光定量 PCR仪(ABI)，DU-640型紫外分光光度计(Beckman)等。

2 方法

2.1 动物模型复制

取传代第12天Lewis肺癌荷瘤小鼠，剥离瘤组织，选取生长良好的肿瘤组织制备肺癌细胞悬液，每只小鼠右腋皮下接种0.2ml(经台盼蓝染色并计数，约含活细胞1×106个/ml)。……