张生权

湖南省张家界市慈利县人民医院肾内科，湖南慈利 427200

绞股蓝提取物对糖尿病肾病大鼠血液流变学和炎性因子影响的实验研究

张生权

湖南省张家界市慈利县人民医院肾内科，湖南慈利 427200

目的 初步探讨绞股蓝提取物对糖尿病肾病大鼠血液流变学和炎性因子的影响。 方法 将40只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、绞股蓝大剂量组（5 mg/kg）和小剂量组（2.5 mg/kg）；模型组、大剂量组和小剂量组大鼠使用腹腔注射链脲佐菌素方法制作糖尿病肾病模型；绞股蓝大小剂量组按照上述剂量给予绞股蓝提取物灌胃，1次/d，持续10周，空白对照组和模型组则给予同剂量蒸馏水灌胃；实验结束时腹主动脉取血检测血液黏度、总胆固醇、三酰甘油及炎症因子。 结果 绞股蓝提取物可以有效降低糖尿病肾病大鼠血液黏度、血浆黏度及总胆固醇和三酰甘油水平，与模型组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）；同时可明显降低糖尿病肾病大鼠血清TNF-α、IL-6和CRP水平，与模型组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。 结论 绞股蓝提取物具有改善糖尿病肾病大鼠血液流变学及微炎症状态的作用，值得进一步研究。

糖尿病肾病；绞股蓝提取物；血液流变学；炎症因子

糖尿病肾病（DN）是糖尿病微血管并发症之一，早期症状不明显，晚期常导致患者慢性肾功能不全，是糖尿病患者的重要死亡原因。在DN的发生发展过程中，血流动力学异常起着关键的作用，甚至可能是始动因素[1]，其次，相关研究表明以肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）及 C反应蛋白（CRP）为代表的炎症介质，也被认为对DN的发病起着不同程度的促进作用[2]。现代药理学研究证明绞股蓝具有降低血脂、降血压、防止衰老、抑制肿瘤、增强免疫力、镇静止痛、保护心脏和肝脏、抗动脉粥样硬化、保护血管等作用[3]。有关绞股蓝提取物对DN患者血液流变学及炎症因子影响的基础研究鲜有报道，因此笔者以该立据为切入点进行了实验研究，现总结报道如下：

1 材料与方法

1.1 实验材料

取1.5 kg绞股蓝（购自绥宁县华润绞股蓝制品厂），用捣碎机捣碎，过滤残渣，滤液备用，将残渣用950 mL/L乙醇对流提取2次，每次1 h，合并滤液，减压回收至无乙醇味。分别予石油醚及乙酸乙酯萃取，最后用蒸馏水稀释，制成不同浓度的绞股蓝乙酸乙酯提取物保存备用[4]；上述流程均在本院药剂科完成。

1.2 试剂及仪器

链脲佐菌素（streptozocin，STZ，由由北京中生瑞泰科技有限公司提供）；大鼠 TNF-α、IL-6酶联免疫试剂盒（96T，由上海轩昊科技发展有限公司提供）；CRP免疫比浊法试剂盒（由北京绿源博德生物科技有限公司提供）；0.1 mmol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（生产批号：T2011467，由北京化工厂生产）；血糖试纸（由德国宝丽曼公司提供）；血液流变仪（型号：LB-2AV，由上海富众生物科学有限公司提供）；全自动生化分析仪（型号：GRT3000，由济南格利特公司提供）。

1.3 实验动物

Wistar大鼠40只 （由长沙市开福区东创实验动物科技公司提供），雌雄各半，6～8 周龄，体重 200～230 g，清洁级，普通喂养，自由进食。

1.4 DN模型制作

Wistar大鼠购入后进行适应性喂养，1周后按照文献[5]中的方法对随机抽取的30只大鼠建模，具体如下：空腹10 h后注射STZ（用0.1 mmol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液将STZ配制成浓度为1%的溶液，按40 mg/kg剂量注入大鼠腹腔内）；每周采大鼠尾部静脉血（空腹12 h），使用血糖试纸测定血糖，当血糖持续≥16.7 mmol/L时可判定为大鼠糖尿病模型；STZ注射2周后，尿常规测定出尿蛋白阳性时，判定为DN形成。

1.5 分组及给药方法

10只未作任何处理的大鼠设立为空白对照组（A组）；30只建模成功的大鼠随机分为模型组 （B组）、绞股蓝大剂量组（C组）和小剂量组（D组）；绞股蓝大小剂量组分别按5 mg/kg和2.5 mg/kg灌胃给药，每日1次；空白对照组和模型组按同容积蒸馏水进行灌胃，每日1次，共持续10周。

1.6 标本采集

造模后第0、2、5、8及10周，采大鼠空腹尾尖血进行血糖测试；造模后第10周时，禁食禁水12 h，乙醚麻醉下处死动物，经腹主动脉取血，分2份后-80℃独立保存待测。

1.7 指标检测

（1）血液流变学检测：一份血液标本经EDTA抗凝，用LB-2AV 血液流变仪分别测定高切（94.5 s-1）、低切（0.945 s-1）、全血黏度及血浆黏度，采用全自动生化分析仪测定总胆固醇（TC）和三酰甘油（TG）；（2）炎症因子测定：另一份血液标本离心分离血清，使用ELISA法测定大鼠TNF-α、IL-6，使用免疫比浊法测定CRP，均按照试剂盒说明书严格操作。

1.8 统计学方法

2 结果

实验期间共有4只大鼠死亡，其中B组死亡2只，C组和D组各死亡1只；B组多只大鼠体重出现明显下降，可见多饮、多食及多尿，不同程度出现精神萎糜、反应迟钝、毛竖无光泽及动作迟缓等不良反应，而C组和D组大鼠精神、活动情况及反应灵敏度均明显优于B组。

2.1 血液流变学

给药10周后，模型对照组、绞股蓝大剂量组和小剂量组的全血黏度、血浆黏度以及TC和TG水平，均高于空白对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；绞股蓝大剂量组与小剂量组全血黏度及血浆黏度，均较低于模型对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；绞股蓝大剂量组与小剂量组大鼠的总胆固醇和三酰甘油水平均低于模型对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；而无论血液黏度、血浆黏度，还是总胆固醇及三酰甘油水平，绞股蓝大剂量组与小剂量组比较，均差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 各组大鼠第10周血液流变学指标检测结果（±s）

表1 各组大鼠第10周血液流变学指标检测结果（±s）

注：与 A 组比较，aP＜0.01，bP＜0.05；与 B组比较，cP＜0.05；与 C组比较，dP＞0.05

组别 例数（n）全血黏度（mPa·s）高切 低切血浆黏度（mPa·s）TC（mmol/L）TG（mmol/L）A组10 B组C组D组8 9 9 4.39±0.51 6.27±0.38a 5.01±0.29bc 5.12±0.17bcd 8.32±1.21 15.49±1.57a 12.35±1.69ac 12.46±1.58bcd 0.59±0.27 1.28±0.15a 0.91±0.22bc 0.93±0.18bcd 1.82±0.55 3.27±0.89a 2.45±0.47bc 2.38±0.41bcd 0.93±0.29 1.78±0.91a 1.05±0.37bc 1.07±0.15bcd

2.2 炎症因子

给药10周后，绞股蓝大剂量组与小剂量组TNF-α、IL-6和CRP水平，均低于模型对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；但大剂量与小剂量组之间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。 见表 2。

表2 各组大鼠第10周炎症因子检测结果（±s）

表2 各组大鼠第10周炎症因子检测结果（±s）

注：与A组比较，aP＜0.01；与B组比较，bP＜0.01；与C组比较，cP＞0.05

组别 例数（n）TNF-α（pg/mL）IL-6（pg/mL）CRP（μg/mL）A组10 B组C组D组8 9 9 51.39±6.87 140.21±8.69a 93.51±7.23abc 94.25±6.91abc 11.39±2.33 27.47±1.54a 21.08±1.27abc 21.33±1.09abc 68.34±19.85 99.21±17.37a 75.29±14.85abc 76.33±15.67abc

3 讨论

糖尿病肾病是糖尿病最常见、最严重的微血管并发症之一，高血糖、脂代谢紊乱、血流动力学及血流变性的异常等是糖尿病肾病发病的原因，同样也是导致糖尿病肾病进展的原因[6]。血液流变学的异常是糖尿病微循环障碍的主要原因之一，微血管并发症是DN发生发展过程中的重要不利因素，血液流变学的异常往往在微血管并发症出现之前就已存，并且不同程度地促进了并发症的发生，糖尿病患者血液流变学异常时的主要表现为血液呈高凝状态、血液流速减慢和微血栓形成[7-8]。本组研究显示，DN造模成功的大鼠同正常大鼠比较，均不同程度存在血液流变学的异常，主要是全血黏度（高切及低切）、血浆黏度、总胆固醇和三酰甘油的异常升高。同时，近年来众多研究结果显示体内微炎症状态与DN的发病密切相关，巨噬细胞、T细胞等免疫细胞在多种黏附因子、趋化因子和细胞因子的作用下在肾脏募集，引发局部炎症反应，加重血管损伤和基质纤维化[9]，上述免疫细胞通过分泌产生此类炎症因子来调节免疫应答作用，并最终参与了炎症反应。本组研究结果显示，经STZ诱导制作的DN大鼠模型，TNF-α、IL-6和CRP的水平明显高于正常组大鼠。因此，本研究显示了血液流变学的异常和炎症因子的过度表达，与DN的发生发展密切相关，具有不同程度的促进作用。

绞股蓝是葫芦科绞股蓝属多年生攀缘草质藤本植物，又称七叶胆、公罗锅底，它以全草供药食兼用，味苦、性寒，具有清热解毒、补气、止咳、祛痰之功效。研究发现，绞股蓝具有多种生物活性，如调节机体免疫力、抗肿瘤、降低血脂、心血管保护等；含有多种化学成分，其中绞股蓝多糖是其活性成分之一[10]。国内相关学者[11-13]发现，绞股蓝颗粒对糖尿病肾病大鼠血管活性物质表达的影响，发现其可显著减少肾组织NO含量，改善早期DN肾小球高灌注、高滤过的状态，延缓肾小球硬化，同时减少AGEs形成、抑制RAGE基因表达、降低血糖、减少TGF-β分泌、抑制细胞外基质产生和积聚，减少糖尿病肾病小鼠的蛋白尿、保护肾功能。本组研究发现，绞股蓝提取物可以有效改善DN大鼠血液流变学，并降低血清内TNF-α、IL-6和 CRP水平。

综上所述，绞股蓝提取物具有改善糖尿病肾病大鼠血液流变学及微炎症状态的作用，值得进一步研究。

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The experimental study of Gynostemma extract for the hemorheology and inflammation factors of rat with diabetic nephropathy

ZHANG Shengquan
Department of Nephrology,Cili County People′s Hospital of Zhangjiajie City in Hu′nan Province,Cili42720,China

ObjectiveTo investigate the effects of Gynostemma extract on the hemorheology and inflammation factors of diabetic nephropathy rats.MethodsForty wistar rats were randomly divided into control group,model group,high-dose of Gynostemma group (5 mg/kg)and low-dose of Gynostemma group (2.5 mg/kg);streptozotocin injection were given to the rats in model group,high-dose Gynostemma group and low-dose Gynostemma group by intraperitoneal as the diabetic nephropathy models.The rats in high and low dose of Gynostemma groups were given the above dose of Gynostemma extract by intragastric administration,1 time/d,for 10 weeks;The rats in blank control group and model group were treated with the same dose of distilled water.The viscosity,total cholesterol,triglycerides and inflammatory factors were detected by extracting the abdominal aortic blood of all rats at end of the experiment.ResultsThe blood level of viscosity,plasma viscosity,total cholesterol and triglyceride in rats with diabetic nephropathy were effectively reduced by Gynostemma extract,comparing with model group,and the difference had statistical significance(P<0.05);Meanwhile,the blood level of TNF-α,IL-6 and CRP were either lowered by Gynostemma extract,compared with model group,the difference had statistical significance(P<0.05).ConclusionGynostemma extract can effectively improve the hemorheology and micro-inflammatory state of the rats with diabetic nephropathy,which deserves further study.

Diabetic nephropathy;Gynostemma extract;Hemorheology;Inflammatory factors

R-33

A

1674-4721（2012）11（b）-0012-03

2012-07-20 本文编辑：林利利）