崔 洁，范英昌，薛 亮

（天津中医药大学，天津 300193）

骨髓间充质干细胞（MSCs）是成体干细胞的一种，具有自我更新的能力与多向分化、增殖的潜能，在一定条件下可分化为多种组织细胞。具有自体获得、易培养、移植后能长期存活且不会产生排斥反应、可被外源基因转染并长期表达的优点。近年来越来越引起人们的关注，成为组织工程、细胞治疗、基因治疗及器官移植的研究热点，在多学科多领域作为一种理想的种子细胞得到了广泛应用。骨髓间充质干细胞虽然在体内的来源比较广泛，但数量极少。而组织工程与细胞工程开展的首要条件是种子细胞的获取和传代培养，如何能够在体外获得足够数量和较高纯度的种子细胞极其重要。通过本研究拟建立一种体外分离培养、扩增骨髓间充质干细胞的理想方法，并观察其生长特性，探讨其鉴定方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 7周龄健康雄性Wistar大鼠，体质量250～300 g，购于中国医学科学院放射医学研究所实验动物中心，动物许可证号为SCXK（2005-0001）。

1.1.2 主要试剂 特级胎牛血清（FBS，美国Hyclone公司），胰蛋白酶（1∶250，美国 Hyclone公司），Percoll（Parmacia），乙二胺四乙酸（EDTA，天象人生物技术研究所），青霉素、链霉素（Hyclone），D-Hank液（南京化学试剂厂），CD44兔多克隆抗体，CD43兔多克隆抗体，PBS缓冲液。

1.2 方法

1.2.1 MSCs的分离、原代培养方法 取雄性Wistar大鼠，颈椎脱臼处死，无菌条件下取双侧股骨、胫骨，再用适量D-Hank液反复冲洗骨髓腔，100目筛网过滤，采用Percoll分离液，行密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞，将密度为1.073g/mL的Percoll预先置于试管……