于 静，杨承槐，李俊平，李启红，刘 丹，夏业才，蒋桃珍，李慧姣

(中国兽医药品监察所，北京 100081)

鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis，IB)是由传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus，IBV)引起的鸡的一种急性高度接触性呼吸道传染病［1］，主要侵害鸡的呼吸、泌尿生殖和消化系统等［2］。其特征症状为病鸡咳嗽、喷嚏、气管罗音;幼鸡流鼻液;蛋鸡产蛋数量和品质下降，是严重危害养禽业的主要传染病之一。IBV易发生变异［3］，分型复杂，不同毒株在毒力、致病性和组织嗜性上存在很大差异［4］。一些毒株用传统的种毒鉴定方法很难准确鉴别，尤其是血清型相同，但基因型不同的毒株更难鉴别。

IBV M41、H52 和 H120 株均为 M41 血清型［5］。在种毒鉴定、活疫苗鉴别检验时均用单特异的M41型高免血清中和后接种鸡胚，观察鸡胚是否出现病变，因此无法通过血清中和试验区分三个毒株。本研究采用分子生物学技术［6］，对IBV序列中差异较大的序列进行分析，建立了IBV三个毒株的PCR鉴别方法，提高了鉴别特异性。

1 材料与方法

1.1 毒种 IBV种毒株 H52、H120及 M41株，鸡传染性法氏囊病病毒B87、火鸡疱疹病毒Fc－126株以及新城疫病病毒La Sota株、鸡痘病毒鹌鹑化弱毒株，均由中国兽医微生物菌种保藏管理中心保存。

1.2 试剂 病毒RNA抽提试剂盒、病毒DNA提取试剂盒为OMEGA公司产品;反转录酶系统为Invitrogen公司产品;限制性内切酶NaeⅠ为大连宝生物公司产品;PCR产物纯化试剂盒为天根生化科技公司产品。

1.3 引物设计

1.3.1 引物A的设计 参照GenBank上发表的全基因组序列，在序列差异较明显的2898～4688 bp处设计一对引物:

该引物能从M41株基因组中特异性扩增出长度为1791 bp片断，而不能扩增H52株和H120株。……