胡刚叶，苌生科，庄金山，白朝勇，张许科，

(1.河南农业大学动物传染病与微生物实验室，郑州 450002;2.国家兽用药品工程技术研究中心，河南洛阳 471000)

猪瘟病毒(CSFV)的E2基因编码的蛋白是引起动物机体产生保护性免疫的主要抗原蛋白［1］。目前已被批准生产的猪瘟标记疫苗是Advasure®(Pfizer，UK)和 Porcilis Pesti® (Intervet，the Netherlands)［2］，二者均是以猪瘟病毒E2蛋白为基础开发的亚单位疫苗，可以很容易通过检测其它相关抗体来区别免疫猪和感染猪。

杆状病毒表达系统是一种高效的真核表达系统，能够有效进行蛋白质的翻译后加工，如转运、分泌、糖基化、脂酰基化等，其表达的外源蛋白结构与天然蛋白结构非常接近。近年来，通过家蚕幼虫和蚕蛹感染重组杆状病毒表达外源蛋白的方法成功地应用于一些蛋白的表达，外源蛋白的表达量得到大幅提高。周耐明等［3］利用重组的家蚕核型多角体病毒(BmNPV)在家蚕幼虫和蚕蛹中高效表达了具有生理活性的 HBsAg，表达量高达750 μg/蚕。肖庆利等［4］利用重组的BmNPV在家蚕幼虫中高效表达了禽马立克氏病毒糖蛋白B抗原，每1 mL蚕血淋巴表达量可达1 mg。

本文利用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)Bac-to-Bac表达系统构建了含有CSFV E2基因的重组AcNPV。重组病毒感染昆虫细胞后通过分泌途径产生重组CSFV E2蛋白，在家蚕蛹中亦成功表达出CSFV E2蛋白。

1 材料与方法

1.1 材料 猪瘟活疫苗购自哈尔滨维科生物技术开发公司(生产批号:2010005);AcNPV Bac-to-Bac表达系统试剂盒、pFastBacHBM-TOPO载体、DH10Bac感受态细胞均为Invitrogen公司产品;Sf9细胞由国家兽药工程技术研究中心保存;QIAamp Viral RNAMini Kit由QIAgen公司……