赵 英 王惠敏

(内蒙古自治区人民医院，内蒙古 呼和浩特 010017)

本品主要由红花、黄精、石膏、牛黄、瞿麦、香青兰等7味药材组成。具有清肝热作用，用于肝热目赤、黄疸、肝区疼痛、发烧口渴、头痛等，收载卫生部药品标准蒙成分册〔1〕。

1 仪器、试剂及样品

1100 型高效液相色谱仪(美国 Agilentg公司制造);TJ－912色谱分析平台。非罗门 Kromasil C18柱(200×4.6 mm，5μm)。超声波清洗机(B2500－MT，上海必能信超声波清洗机有限公司);BT224S电子分析天平(北京赛多利斯仪器公司)

甲醇、乙腈:色谱纯，由天津协和昊鹏试剂公司生产;磷酸为分析纯;水为三蒸水。羟基红花黄色素A(含量测定用，批号111637－200503)由中国药品生物制品检定所提供。额力根－7(批号20060805，20020712，20080301)由内蒙古中蒙医医院蒙药制剂中心出品。

2 方法与结

2.1 色谱条件:色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，本试验用非罗门 Kromasil C18柱(200 ×4.6 mm，5μm);流动相:甲醇－乙腈 –磷酸－水(30:5:0.2:110);流速:1mL·min－1;测定波长403nm;柱温30℃。以上条件均可基线分离样品中羟基红花黄色素A，按理论板数峰计算应不低于 3000〔2〕。

2.2 测定溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备:精密称取羟基红花黄色素A对照品6.25mg，置25mL量瓶内，加25%甲醇溶解至刻度，取对照品溶液 0.1、0.5、1、2、4、8 mL，分别加到 10 mL 棕色量瓶容量瓶内，加25%甲醇至刻度。

2.2.2 供试品溶液的制备:取本品(批号20060805)，粉碎，研细，过100目筛，精密称重25mg，置50mL具塞锥形瓶中，精密加25%甲醇10mL，称定重量，超声处理(功率100W，频率40kHz)40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静止，滤过，即的。

2.2.3 阴性试验:依照样品制备方法制备不含红花的额力根－7阴性制剂，依照色谱条件测定，阴性对照品在羟基红花黄色素A保留时间内无干扰峰出现，表明其它药材对羟基红花黄色素A的测定无干扰。见图1、2、3。

2.3 线性关系考察:精密吸取对照品溶液10μL，按色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，对照品含量为横坐标，绘制标准曲线，作回归分析。回归方程:Y=Y=2337653χ －31123，r=0.999。羟基红花黄色素 A 在 0.0025～0.2mg范围内线性关系良好。

2.4 精密度试验:精密吸取同一供试品溶液10μL，连续进样5次，测定羟基红花黄色素A，峰面积RSD为0.5%。

2.5 重复性试验:取同批次样品，按2.2项下的方法制备样品5 份。测定结果，平均含量为1.34mg·g－1，RSD 为1.4%

2.6 稳定性试验:取同一供试品溶液10μL，分别于样品制备后第0、2、8、12h测定羟基红花黄色素A峰面积，峰面积值RSD为0.8%。样品溶液在12h内稳定。

2.7 回收率试验:取已知羟基红花黄色素A含量的额力根－7样品，置10mL容量瓶内，分别精密加入羟基红花黄色素A对照品溶液，加25%甲醇至刻度，溶液转入置50mL具塞锥形瓶中，按供试品方法制备，提取，过滤。按色谱条件测定，平均回收率与RSD为102.7%、2.9%。2.8 样品测定:分别吸取对照品溶液与样品溶液10μL，依上述色谱条件测定3批样中羟基红花黄色素A含量，3批样品分别为 1.35、1.22、1.16 mg·g－1，平均含量分别为1.24mg·g－1。

表1 额力根－7中羟基红花黄色素A回收率测定

3 讨论

本试验的提取方法与“索氏”提取法进行对比测定，“索氏”法样中羟基红花黄色素A溶出时间长，而超声处理方法溶出羟基红花黄色素A方法简便、省时。提取时间测定，样品超声处理40min后羟基红花黄色素A含量不再增加。耐用性试验 ，用 Agilent XDB－C8柱 (150×4.6 mm，5μm)在本试验条件下测定样品，羟基红花黄色素A基线分离。3批样品测定表明，羟基红花黄色素A含量差异较大，可能药材质量或投料制备有关。采用HPLC法测定额力根－7羟基红花黄色素A指标性成分，可作为该药质量控制的方法之一。

〔1〕国家药典委员会编辑.卫生部药品标准蒙药分册〔S〕.1998，167

〔2〕国家药典委员会编辑.中国药典一部〔S〕.中国医药出版社，2010，143