王 瑄 段红茹 曹旭东 曲 红 穆 云 孙续国

肺感染性疾病可形成胸腔积液。目前临床上常检测胸腔积液葡萄糖及蛋白含量等指标以鉴别渗出液和漏出液[1-2]，或者用较为灵敏的自动化仪器检测胸腔积液中特异微生物的种类和型别[3-4]。该类患者肺部组织细胞转甲状腺素（TTR）蛋白及mRNA均阴性，血清含量为150～300 mg/L。最近有研究认为TTR表达与肿瘤表达有关系[5]。本研究旨在探讨胸腔积液和血清中TTR蛋白的含量及其化学修饰类型在诊断肺感染性疾病中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2010年12月—2011年5月于天津市胸科医院就诊的肺感染性疾病合并胸腔积液患者（患者组）22例，男16例，女6例，年龄18～78岁，平均（52.0±18.4）岁。另选取经过检查健康志愿者16例为对照组，男10例，女6例，年龄42～65岁，平均（55.2±11.2）岁。肺感染的诊断参考2008年修订内科诊疗标准。2组性别（χ2=0.448）和年龄（t=0.721）差异无统计学意义（均P>0.05）。

1.2 方法 患者采空腹血，分离血清2 mL用于生化项目测定。同时采集胸腔积液留取10 mL用于其生化项目的测定和细胞形态学、细胞计数测定。利用TBA120全自动生化分析仪(日本东芝公司)，测定血清和胸腔积液中各生化指标，总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）的含量应用化学反应方法测定；葡萄糖（GLU）、三酰甘油（TG）、胆固醇（Cho）含量和乳酸脱氢酶（LDH）与腺苷脱氨酶（ADA）的活性用酶动力学法测定，试剂购自上海执诚生物技术有限公司和北京科美生物技术有限公司。利用TOSHIBA-40分析仪（上海执诚生物试剂有限公司）测定血清和胸腔积液的TTR、载脂蛋白（Apo）A、ApoB含量，严格按照操作要求进行。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）法分析TTR蛋白的化学修饰，150 μL血清或胸腔积液标本中加入15μL抗-人血清TTR抗体，37℃作用1 h，9 000×g离心5 min，沉降物分别用生理盐水和双蒸水各洗涤2次，最后使TTR蛋白与相应抗体分离，质谱分析TTR蛋白的化学修饰。

1.3 统计学分析 采用SPSS11.5软件进行统计学处理，正态分布计量资料用±s表示，否则用M（P25，P75）表示，组间比较进行t检验或秩和检验；计数资料组间比较行χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 患者组胸腔积液与血清的生化成分含量比较 除LDH差异无统计学意义外（P>0.05），其他各指标差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01），见表1。

Table 1 Comparison of biochemical ingredients between pleural effusion and serum in patients表1 患者组胸腔积液与血清的生化成分含量比较[n=22，±s或M（P25，P75）]

Table 1 Comparison of biochemical ingredients between pleural effusion and serum in patients表1 患者组胸腔积液与血清的生化成分含量比较[n=22，±s或M（P25，P75）]

*P<0.05，**P<0.01

部位胸腔积液血清t TG（mmol/L）0.26±0.13 1.02±0.33 9.978**Cho（mmol/L）1.47±0.72 3.67±0.86 9.203**TTR（mg/L）68.60±35.5 148.101±52.21 5.860**ApoA（g/L）0.47±0.28 0.94±0.18 6.654**ApoB（g/L）0.53±0.14 0.96±0.14 10.154**部位胸腔积液血清t或Z TP（g/L）35.36±11.53 62.31±7.10 9.065**ALB（g/L）21.44±7.95 36.46±4.72 7.578**ADA（U/L）15.66±8.89 7.90±2.35 3.781**GLU（mmol/L）3.67（2.63，7.00）5.29（4.61，5.83）2.408*LDH（U/L）212.60±131.76 190.73±63.60 0.674

2.2 患者组选定蛋白血清含量及其半衰期 血清中ALB和球蛋白含量分别为TTR蛋白的约243倍和172倍，血清中TTR蛋白分子大小与白蛋白相近，而TTR半衰期约2 d，见表2。

2.3 肺感染患者血清与胸腔积液TTR蛋白的化学修饰结果比较 对照组血清TTR蛋白存在有3种类型修饰峰，b：磺化（sul）-TTR；c：半胱氨酰化（cys）-TTR；d：半胱氨酰甘氨酰化（cysgly）-TTR。患者组血清和胸腔积液只有b和c的修饰峰，均未检测到d型修饰峰，见图1、见表3。

Table 2 The half-life of serum proteins表2 血清蛋白含量及半衰期

Figure1 Chemical modification of TTRproteinsby MALDI-TOF-MSanalysis图1 MALDI-TOF-MS法分析TTR蛋白的化学修饰

Table 3 The proportion of chemically modified type in the total TTR proteinsin serum and pleural effusion表3 血清和胸腔积液中发生化学修饰TTR占总TTR的比例 （%）

3 讨论

通过检测血清实验指标用于辅助诊断肺感染已经广泛用于临床实验诊断。分析肺感染并发胸腔积液中来源于血浆的生化指标，可能更直接反应肺感染。大量研究已经证实血清内TTR蛋白几乎全部来源于肝脏细胞合成分泌[6]。胸腔积液内TTR蛋白来源于肝脏实质细胞，经过血液和淋巴液途径转运而来。本研究结果显示，胸腔积液内TTR含量明显低于血清，提示其有可能作为一项辅助诊断指标。肺感染患者胸腔积液中白细胞数量增加，可导致胸腔积液中ADA活性升高，但是肺肿瘤等ADA也可增高，作为辅助诊断指标存在非特异性。胸腔积液GLU含量在是漏出液时与血糖接近，在胸腔积液内存在细菌感染时，由于细菌消耗可导致GLU含量降低。同时测定血清和胸腔积液GLU含量有助于诊断，但是血清中含量容易受激素等其他因素影响，因此作为诊断生物标志物存在局限性。

目前，临床已经成功制备TTR抗体，酶联免疫法测定TTR技术成熟，测定结果稳定和特异。本研究显示，患者组血清和胸腔中TTR和ALB差异有统计学意义，但TTR比ALB变化幅度较大，且TTR蛋白半衰期短于白蛋白，因此，笔者认为通过含量的变化辅助肺感染诊断TTR优于白蛋白。TTR作为肝脏分泌的蛋白与机体营养可能密切相关，肺感染患者TTR水平降低难以排除营养因素干扰，因此笔者认为增加TTR化学修饰指标可能有助于诊断。

先前笔者建立MALDI-TOF-MS分析TTR蛋白的蛋白修饰，方法可靠适用[7]。本研究表明肺感染患者组检测到2种TTR修饰峰，其血清及胸腔积液中均未见cysgly-TTR的修饰类型，并且肺感染患者血清和胸腔积液中cysgly-TTR比例明显低于对照组血清，提示胸腔积液内TTR蛋白含量与cys⁃gly-TTR的比例，有可能作为肺部感染诊断的参考指标。因此，测定肺感染患者血清和胸腔积液TTR蛋白含量减少，同时cysgly-TTR修饰类型明显降低，有可能作为诊断肺感染的参考指标。

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[2]黄生峰，孙圣华，刘宗道，等.485例胸腔积液临床分析[J].中国当代医药，2011，18（12）：166.

[3]徐金平，莫丽娟.核酸扩增检测结核杆菌DNA与抗酸杆菌涂片镜检结果的比较[J].检验医学与临床，2011，8（3）：348-349.

[4]刘秀云，江载芳.小儿重症社区获得性肺炎31例病原分析[J].中国实用儿科杂志，2005，20（12）：749-750.

[5]Liu L,Liu J,Dai S,etal.Reduced transthyretin expression in sera of lungcancer[J].Cancer sci,2007,98(10):1617-1624.

[6]Richardson SJ.Evolutionary changes to transthyretin:evolution of transthyretin biosynthesis[J].FEBSJ，2009,276(19):5342-5356.

[7]孙续国，刘金平，宋剑蝉，等.利用MALDI-TOF-MS法测定转甲状腺素蛋白的基因突变和化学修饰[J].中华临床防治医学杂志，2010，5（2）:4-7.