王艳红，李昊宇，韩立君，张勇凯，庞旭光

(吉林铁路疾病预防控制所，吉林 吉林 132001)

苯、甲苯、二甲苯统称为混苯，是一种工业用途广泛的职业有害因素，苯是人类致癌物和致突变物，具有致肿瘤和生殖毒性作用，甲苯、二甲苯的致突变性目前尚不确定，但越来越多证据表明两者均有可能是致突变剂。倪祖尧等［1－2］的研究表明混苯作业工人外周血DNA损伤明显增加。为了解接触混苯作业工人外周血淋巴细胞微核率，我们于2012年5月对吉林某地35名接触混苯作业工人用细胞培养法检测外周血淋巴细胞微核，结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 对象

吉林某地接触混苯作业工人35名为实验组，20名工人为对照组，除不接触混苯外其他条件与实验组相近。

1.2 试剂

RPMI1640 培养基(5 mL):PHA(30 μg/mL)+双抗 +胎牛血清(10%)+谷氨酰胺(0.002 mol/L)pH(7.0±0.2)，购于北京协和基础所;固定液:甲醇∶冰醋酸 =4∶1(体积比)，用前配，并放4℃保存2 h以上;低渗液:即配制0.075 M氯化钾溶液，取3 g氯化钾溶于536 mL双蒸水即可，用前4℃存放2 h以上;Giemsa染液:Giemsa:磷酸盐缓冲液(pH6.8)=1∶9(体积比)，用前配。

1.3 方法

1.3.1 约0.4 mL的肝素抗凝血，加5 mL培养瓶中，混匀以防止血凝块形成，37℃培养72 h。

1.3.2 小心吸弃大部分上清液(余下不超过4 mL)，轻柔吹匀，转移入10 mL离心管中。150 g离心7 min，吸弃上清液。

1.3.3 加入2 mL 0.075 M氯化钠(4℃)，轻柔吹散(6下)，立即加入固定液1.5 mL(4℃)，混匀(5下)，150 g离心10 min，吸弃上清液。

1.3.4 沿管壁缓缓加入3 mL固定液，混匀，立即150 g离心10 min，吸弃上清液。

1.3.5 再次加入3 mL固定液，混匀，150 g离心10 min，吸弃上清液。如液体不呈透明色，需重复1次。

1.3.6 剩余500 μL固定液，吹散混匀。

1.3.7 滴片:将玻片从冰水中取出，滴片(10 cm高度)，自发干燥。……