徐秋良，朱宽佑，刘永祥，姜东凤，程 伟

（郑州牧业工程高等专科学校畜牧工程系，河南 郑州450011）

缺乏降温设施以及高密度饲养使中小型肉鸡场在夏季高温季节面临热应激的危害。热应激不仅降低肉鸡采食量、日增重和饲料转化率［1］，甚至引起机体免疫抑制，使肉仔鸡死亡率升高。研究表明，热应激损伤腔上囊、淋巴结等免疫器官［2］，降低血液中IgG水平和外源的抗体滴度［3］，并降低外周血T、B淋巴细胞转化率［4］。其主要原因是热应激使细胞线粒体活性氧自由基增加，导致氧化和抗氧化系统失衡，引起机体脂质过氧化，损伤蛋白质、DNA和生物分子［5］。

实际生产中，维生素E的抗氧化作用和免疫增强作用已得到广泛应用［6－7］，但在热应激条件下的应用研究报道不多。本试验在热应激下探讨维生素E免疫增强效果及适宜添加剂量，为维生素E在夏季肉仔鸡日粮添加量提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物 从开封正大有限公司购进AA肉仔鸡400只，分成4个处理组，每组5个重复，每重复20只（公母各半）。对测定不同指标的试验鸡进行标记，避免个体差异对试验结果的影响。

1.2 试验日粮 按美国NRC（1994）肉鸡营养需要标准配制玉米－豆粕型基础日粮，维生素E的添加量分别为20、50、100、150mg／kg，维生素 E为 Roche之dl－α－生育酚醋酸酯。

1.3 免疫程序及途径 7日龄，北京华都公司新城疫Ⅳ系苗3头份／只，滴鼻；14日龄，北京华都公司腔上囊弱毒苗3头份／只，饮水；25日龄，北京华都公司新支二联苗3头份／只，饮水。

1.4 饲养管理 试验鸡采用单层笼养，粉料投喂，自由饮水与采食。试验在夏季进行，试验期鸡舍平均温度在30℃～35℃。

1.5 测定指标

1.5.1 抗体效价 3、6日龄于大群中随机挑选15只鸡，心脏采血，离心分离血清，测定新城疫（ND）母源抗体。9日龄开始到49日龄每组重复标记10只鸡，翅静脉采血，血样置于37℃温箱1h，析出血清，4℃保存备用。采用血清倍比稀释法，红细胞凝集抑制（HI）试验测定新城疫（ND）抗体效价，取血清稀释倍数的log2作为统计数据［8］。

1.5.2 淋巴细胞α－醋酸萘脂酶阳性百分率 各重复标记3只鸡，于10、14、2 1、28、35、4 2、49日龄心脏采血1mL／只，加入 Hank＇s液1mL，轻轻滴加于离心管中的2mL淋巴细胞分层上（比重为1.007±0.001），以2 000r／min离心30min。洗涤后，加少量Hank′s液，摇匀，制片、固定、染色、复染、镜检。

1.5.3 免疫器官指数 胸腺、脾脏、腔上囊指数按以下公式计算：免疫器官指数＝（免疫器官重／宰前活重）×100%

1.6 数据处理 应用SAS软件对各处理数据进行统计比较分析，Duncan′s法多重比较。

2 结果与分析

2.1 免疫器官指数 由表1可以看出，与20mg／kg组相比，50、100mg／kg日粮维生素E显著提高肉仔鸡49日龄脾脏、腔上囊指数和胸腺指数（P＜0.05），50、100mg／kg之间脾脏和腔上囊指数差异不显著（P＞0.05）。150mg／kg组49日龄脾脏、腔上囊及胸腺指数显著高于其余处理组（P＜0.05）。日粮添加维生素E 150mg／kg有利于提高夏季高温季节肉仔鸡的免疫器官增重。

表1 肉仔鸡免疫器官指数

2.2 抗体效价 3日龄检测肉仔鸡ND母源抗体水平为6.1，6日龄为5.2，由于各组ND抗体受母源抗体的影响，起始抗体效价不同，因此用抗体的提高程度，即各处理组不同日龄的抗体效价与9日龄的抗体效价差值表示。从表2中可以看出，与20 mg／kg组相比，日粮添加50mg／kg组维生素E在夏季高温环境下对肉仔鸡ND抗体水平没有明显的提升作用，仅在12日龄时高于20mg／kg组（P＜0.05）。与20mg／kg相比，日龄添加100mg／kg与150mg／kg维生素E明显促进肉仔鸡ND抗体水平，其中，9、12、16、19、25、28、38、41、44日龄达到显著水平（P＜0.05）。100mg／kg组与50mg／kg组在整个试验期间对ND抗体的影响差异不显著，只有16、38日龄时100mg／kg组显著高于50mg／kg组（P＜0.05）。与50mg／kg相比，日粮添加150 mg／kg维生素E提高肉仔鸡16、25、38日龄和44日龄ND抗体水平（P＜0.05）。

表2 肉仔鸡新城疫抗体效价（log2）

分析各处理组ND抗体变化规律可知，试验中维生素E添加量不影响高温季节肉仔鸡抗体总体变化规律，在12、25日龄时，20mg／kg组ND抗体效价明显低于保护临界值3log2，而50、100mg／kg组和150mg／kg组ND效价在试验全期均高于保护临界值。

本试验表明，在高温环境下日粮添加维生素E提高肉仔鸡 ND抗体效价，50、100、150mg／kg添加量可降低肉仔鸡感染新城疫的风险，添加量以150 mg／kg为宜。

2.3 淋巴细胞α－醋酸萘脂酶阳性百分率 见表3，与20mg／kg组相比，50mg／kg添加量提高肉仔鸡21、28日龄淋巴细胞阳性百分率（P＜0.05）。在整个试验期，100、150mg／kg除14日龄外，淋巴细胞阳性百分率均高于20mg／kg组；而100、150mg／kg组间在试验全期均差异不显著（P＞0.05）。

表3 肉仔鸡淋巴细胞α－醋酸萘脂阳性百分率

因此，就淋巴细胞阳性率而言，在夏季高温环境下，肉仔鸡日粮添加100mg／kg维生素E较适宜。

3 讨论

为提高研究结果的实用性，本试验没有设置0 mg／kg日粮组，主要考虑到NRC（1994）标准、部分前人研究结果及实际生产中维生素E的用量。此外，对于夏季环境高温，试验没有采用人工温控措施，也是为了模拟中小型养鸡户的生产实际。

夏季高温时，可在鸡舍内安装降温系统缓解高温对肉仔鸡生长的影响，降低死亡率，因投资成本较高，降温系统在中小型养鸡户中并不普遍。因此，使用添加剂缓解热应激，提高肉仔鸡抗病力是目前我国中小型肉鸡养殖场夏季提高生产效益的有效途径。

维生素E具有清除氧自由基，缓解细胞、组织的氧化损伤的功能，作为抗氧化剂和免疫增强剂，维生素E已经在肉鸡生产中得到广泛应用。但有关维生素E适宜的添加量方面的报道结果不尽相同。典型的肉仔鸡日粮维生素E的添加量大致为20～30mg／kg［9］，陈艳君等［10］（2008）报道，肉仔鸡日粮添加15IU／kg维生素E可获得最佳生产性能和免疫力，但1 500IU／kg降低肉仔鸡免疫力。Friedman等（1998）［11］在肉仔鸡日粮中添加0、10、30、150 mg／kg的维生素E研究其对免疫机能的影响，结果表明，30、150mg／kg组抑制肉仔鸡的免疫机能。刘铀等（1999）［12］在肉仔 鸡 日 粮 中 添 加 0、100、200 mg／kg及300mg／kg维生素E表明，随着添加剂量的升高，30日龄肉仔鸡淋巴细胞转化率和ND抗体效价显著上升，高剂量增强肉仔鸡的免疫机能。

本研究结果表明，日粮中添加50、100、150mg／kg维生素E，不同程度的提高肉仔鸡的ND抗体效价和淋巴细胞阳性百分率，综合比较，150mg／kg效果较好，没有出现免疫抑制作用，这可能缘于与适宜温度相比，高温产生的氧化应激提高了维生素E的需要量。

腔上囊、脾脏和胸腺是肉仔鸡的主要免疫器官，是免疫细胞分化产生的场所。维生素E能促进脾脏细胞分裂、当维生素E缺乏时家禽胸腺、腔上囊和脾脏发育受损［13］。研究表明，在热应激条件下，免疫器官的受损程度与氧自由基活性和丙二醛浓度高度相关，为高温环境下造成的机体氧化应激所致［14］。因此，为维持免疫器官的正常功能，夏季高温时肉仔鸡对维生素E的需要量增加。

本研究表明，与20mg／kg相比，50、100、150 mg／kg的维生素E添加量显著提高免疫器官指数，150mg／kg组效果最好。因此，综合肉仔鸡的ND抗体效价、淋巴细胞阳性百分率和免疫器官指数，在本试验条件下，夏季高温时肉仔鸡日粮维生素E适宜添加量为150mg／kg。

［1］Donkoh A.Ambient temperature：a factor affecting performance and physiological response of broiler chickens［J］.Int J BiometeoroI，1989，33：259－265.

［2］崔亚利，郑世学，胡永芬，等.热应激后雏鸡免疫器官组织学结构观察［J］.河北农业大学学报，2004，27（2）：93－96.

［3］高云英，李浩波，姜艳芬，等.高热应激模型下CLA对蛋鸡免疫功能的影响，细胞免疫和体液免疫指标的变化［J］.西北农林科技大学学报（自然科学版），2006，34（9）：21－26.

［4］贾丹，赵江涛.绞股蓝总皂甙对热应激肉鸡免疫功能的影响［J］.山西农业大学学报，2007，27（5）：8－10.

［5］Pamok S，Aengwanich W，Komutrin T.Adaptation to oxidative stress and impact of chronic oxidative stress on immunity in heat－stress broilers［J］.Journal of Thermal Biology，2009，34：353－357.

［6］Yu B P.Celluler defenses against damage from reactive oxygen species［J］.Physiol Rev，1994，74：139－162.

［7］滑静，王晓霞，杨佐君，等.维生素C、E对热应激期蛋鸡血液生化指标的影响［J］.动物营养学报，2001，13（4）：59－62.

［8］阴天榜，刘兴友.家禽免疫学［M］.北京：中国农业科技出版社，1998.

［9］吴金龙.肉鸡的最适维生素营养［J］.中国畜牧杂志，2009，14（45）：54－59.

［10］陈艳君，闫素梅，李慧英，等.维生素A、E对肉鸡生长性能和免疫机能的影响［J］.内蒙古农业大学学报，2008.29（1）：14－19.

［11］Friedman A，Bartov I，Sklan D.Humoral immune response impairment following Execess vitamin E nutrition in the chicken and turkey［J］.Poult Sci，1998，77（7）：956－962.

［12］刘铀，刘艳芬.林红英，等.维生素E对热应激肉用鸡免疫及内分泌功能的影响［J］.中国兽医科技，1999，28（9）：8－10.

［13］胡兰，孙长勉，刘梅.维生素E对肉仔鸡抗热应激的影响［J］.沈阳农业大学学报，2001，32（2）：117－119.

［14］Pamoka，S.Aengwanich W，Komutrin T.Adaptation to oxidative stress and impact of chronic oxidative stress on immunity in heat－stressed broilers［J］.Journal of Thermal Biology，2009，34：353－357.