杨红艳，夏敬民，张见欢，林三清

（湛江师范学院化学科学与技术学院，广东湛江 5 2 4 0 4 8）

盐酸莫西沙星眼用凝胶体外释放行为的3种考察方法比较

杨红艳＊，夏敬民，张见欢，林三清

（湛江师范学院化学科学与技术学院，广东湛江 5 2 4 0 4 8）

目的：筛选考察盐酸莫西沙星眼用凝胶（MHG）体外释放行为的方法。方法：采用紫外法在2 8 5 nm波长处测定人工泪液中盐酸莫西沙星的含量，用改良桨法、透析袋法、扩散池法考察MHG的释药行为并进行比较。结果：3种方法考察MHG的体外释放均更符合Higuchi方程（r分别为0.9 9 9 7、0.9 8 1 5、0.9 9 1 2），1 4 0 min时累积释放率分别约为9 0%、8 0%、3 0%，以改良桨法考察药物的释放速度更快、更完全。结论：盐酸莫西沙星眼用凝胶宜采用改良桨法考察其体外释放行为。

盐酸莫西沙星；眼用凝胶；体外释放；桨法；透析袋法；扩散池法；比较

盐酸莫西沙星（MH）是第4代新型超广谱喹诺酮类抗菌药，其C-7位上二氮杂环结构加强了对革兰阳性菌的抗菌作用，8位引入的碳甲氧基则加强了对厌氧菌的作用[1]，且革兰阳性菌对本品很少产生耐药性或耐药性产生很慢，其对需氧革兰阳性球菌体外抗菌活性比环丙沙星强4～8倍[2]。其在眼内通透性优良，药物浓度较高[3]，眼用制剂可用于治疗敏感菌引起的眼睑炎、睑缘腺炎、泪囊炎、结膜炎、角膜炎等症[4]。

眼用凝胶是一种新型的眼部给药剂型，能克服普通滴眼液在结膜囊内滞留时间短、药物难透过角膜、眼内生物利用度低等问题，可以延长药物在眼部的滞留时间，提高生物利用度。而药物释放的速度和释放持续的时间将影响其在体内的吸收及药效的发挥，因此运用恰当的方法分析和评价药物的释放规律，可以掌握影响药物释放的因素，通过控制药物的释放行为获得预期的治疗效果。本研究主要比较了3种不同释放度测定方法测定MH眼用凝胶（MHG）的体外释药特性的结果，为眼用凝胶体外释放考察方法的选择提供借鉴和参考。

1 仪器与材料

Gold S5 3型紫外-可见分光光度计（上海棱光技术有限公司）；AY-1 2 0型电子分析天平（日本Shimadzu公司）；RYJ-6 A型药物透皮扩散试验仪（上海黄海药检仪器有限公司）；RC8 0 6溶出试验仪（天津市天大天发科技有限公司）。

MH原料药（武汉远城科技发展有限公司，批号：1 0 0 5 0 3，纯度：9 9.9 8%）；卡波姆（9 4 0型，武汉合中化工生物有限公司，批号：2 0 0 9 0 9 0 2）；羟丙基甲基纤维素（HPMC，天津市光复精细化工研究所，批号：2 0 0 7 1 1 1 2）；MHG（自制，规格：每瓶1 0 g ，盐酸莫西沙星含量为：2 mg·g－1）；MH滴眼液（自制，规格：每瓶1 0 mL，盐酸莫西沙星含量为：2 mg·mL－1。该处方中除去了卡波姆和HPMC，其余成分同凝胶）；其他试剂均为分析纯。

透析袋（北京鼎国生物技术有限公司，截留分子量：6 0 0 0～8 0 0 0）。

2 方法与结果

2.1 MHG的制备

2.1.1 处方。MH 0.2 g，卡波姆0.3 g，HPMC 0.5 g，甘露醇5 g，甘油5mL，苯扎溴铵1mL，三乙醇胺适量，蒸馏水加至1 0 0 mL。

2.1.2 制备。按处方量取甘油加入卡波姆研磨细腻后加3 0 mL水，放置过夜，使卡波姆充分溶胀；另取HPMC加3 0mL水，放置过夜，使其充分溶胀。将溶胀后的卡波姆和HPMC溶液混合均匀，再将处方量的MH、甘露醇、苯扎溴铵于搅拌条件下缓慢加入，使其完全溶解，加水至1 0 0 mL，再加入适量三乙醇胺，调节pH值约为7.0，即得MHG。

2.2 MH含量测定

2.2.1 测定波长的选择。精密称取MH原料药适量，用人工泪液（每1L人工泪液包括：2.1 8g碳酸氢钠，6.7 8g氯化钠，0.0 8 4 g二水氯化钙，1.3 8 g氯化钾）制备成1 0µg·mL－1的溶液，以人工泪液为空白，在2 0 0～4 0 0nm波长范围内进行紫外扫描，选择最大吸收波长为测定波长。按处方比例称取辅料，用等量人工泪液溶解，制备不含主药的辅料溶液，进行紫外扫描，考察处方辅料对主药测定的干扰情况。结果，MH在2 8 5 nm波长处有最大吸收，空白辅料在此处无吸收，详见图1。

图1 紫外扫描光谱图Fig 1 Ultraviolet scanning map

2.2.2 标准曲线的制备。精密称取MH原料药适量，用人工泪液制备成4 0µg·mL－1的溶液，精密量取0.2 5、0.5、1.0、2.0、3.0、3.5 mL，分别置于1 0 mL量瓶中，加人工泪液至刻度，摇匀。测吸光度（A），以A对质量浓度（c）进行线性回归，得回归方程为A＝0.0 9 6 2 c+0.0 0 9 1（r＝0.9 9 9 7），结果表明MH检测浓度线性范围为1～1 4µg·mL－1。

2.2.3 精密度试验。取浓度为1 0µg·mL－1的MH溶液，于同日内连续进样6次及连续测定6 d，计算其日内RSD＝0.1 3%，日间RSD＝0.8 4%，表明本方法精密度符合要求。

2.2.4 回收率试验。分别精密称取MH原料药适量，用人工泪液制备成高、中、低（1 4、1 0、6µg·mL－1）3个浓度样品，测定回收率。结果分别为9 9.2%、9 6.1%、9 7.2%，RSD分别为0.3 6%、0.3 7%、1.0 9%。

2.3 体外释药试验

眼用凝胶中药物的释放行为研究多采用改良桨法[5]、Franz扩散池法[6]、透析袋法[7]等。本研究分别采用这3种方法来考察MHG的体外释药行为，以便了解不同释放度测定方法对眼用凝胶药物释放的影响，通过比较分析，从中找出最适于MHG体外释放行为的考察方法。

2.3.1 改良桨法[8]。精密称取2 g MHG，加入西林瓶中，将西林瓶小心放入1 0 0 0 mL溶出杯底部，并使西林瓶中充满释放介质，沿溶出杯壁小心倒入预热至3 5℃的人工泪液5 0 0 mL为释放介质。调节转速为7 0r·min－1，温度3 5℃。分别于1 0、2 0、4 0、6 0、9 0、1 2 0、1 4 0 min取样1 0 mL（同时补充人工泪液1 0 mL），经0.4 5µm微孔滤膜过滤，在2 8 5 nm波长处测定A，采用标准曲线法计算含量，按下式计算累积释放量和累积释放率：Qn＝5 0 0 cn+1 0∑ci（Qi＝5 0 0 ci，n＝1，2，3…）。式中Qn为MH累积释放量，ci为样品浓度，i、n分别为取样次数。绘制释药曲线见图2。

2.3.2 透析袋法。精密称取MHG 2 g，置于透析袋中，袋两头用透析袋夹夹紧（除去袋内气泡），固定于7 0 0 mL人工泪液中，袋上沿距液面约1 cm，人工泪液的温度控制在（3 5±1）℃，置于电磁搅拌器中，转速7 0 r·min－1，其余操作同“2.3.1”项下，绘制释药曲线见图2。

取MH滴眼液2 mL，置于透析袋中，同上操作，测定并计算滴眼液的累积释放率，绘制释药曲线见图2。

2.3.3 扩散池法。将半透膜固定于供给池与接收池之间，有效扩散面积为2.8 cm2，人工泪液为接收液，接收池容量为7.0 mL，透皮扩散试验仪的磁力搅拌转速为2 0 0 r·min－1，水浴温度（3 5±0.2）℃。先于供给池内精密加入2 g凝胶，使其均匀覆盖于半透膜表面。分别于1 0、2 0、4 0、6 0、9 0、1 2 0、1 4 0 min倾出所有人工泪液，再重新加入等量、恒温的人工泪液。经0.4 5µm微孔滤膜过滤，在2 8 5 nm波长处测定A，计算其含量及累积释药率，并绘制释药曲线见图2。

图2 3种方法考察MHG的体外释放曲线比较（n＝3）Fig 2 Comparison of drug release curves in vitro of MHG by 3methods（n＝3）

由图2可以看出，凝胶明显延缓了药物的释放：凝胶（透析袋法）在2 0 min时释放2 7.4%的药物，此后逐步释放，1 4 0 min累积释放率约8 0%；而改良桨法和扩散池法1 4 0 min时累积释放率分别约为9 0%、3 0%。滴眼液在2 0 min时可释放约8 0%的药物，4 0 min时药物几乎释放完全。

结果表明，不同测定方法对药物的释放有明显的影响，其中扩散池法药物释放的速度最慢，改良桨法中药物的释放速度最快。将MHG 3种不同释放度测定方法的体外释放曲线分别以零级、一级和Higuchi方程进行拟合，结果见表1。

表1 体外释放动力学方程拟合结果Tab 1 Release kinetics equation fitting of MHG in vitro

由表1可以看出，Higuchi方程拟合的相关系数最大，说明Higuchi方程能够很好地描述MHG的体外释药特征，表明MHG中药物的体外释放为药物扩散和凝胶溶蚀相结合的作用机制。在3种释放度测定方法中，改良桨法的Higuchi方程的相关系数（r＝0.9 9 9 7）最好；同时从释放曲线可以看出，改良桨法中药物的释放速度及程度均要优于透析袋法和扩散池法。因此，在3种释放度测定方法中，以改良桨法为MHG的体外释药最佳测定方法。

3 讨论

MHG是以卡波姆与HPMC为凝胶基质制成的凝胶制剂，在凝胶状态下，药物的释放被延缓。从体外释放曲线可以看出，3种测定方法结果均表明，与滴眼液比较，制成凝胶后不同程度地延缓了药物的释放；透析袋法与扩散池法对药物释放的阻滞作用较明显，这是由于这2种方法使用了半透膜，具有截留作用，导致聚合物不能扩散进入释放介质，聚合物阻滞了药物的扩散，导致药物的累积释放率低。眼用凝胶制剂易受泪液及眨眼剪切的影响，在眼内逐渐溶蚀并释放出其中的药物；改良桨法不受半透膜的限制，凝胶的溶蚀与药物的释放同步进行。因此，本试验结果表明，改良桨法能较好地考察眼用凝胶的释药行为，宜用于眼用凝胶中药物体外释放度的测定。

[1] 李培军，乔 军.莫西沙星的作用特点及临床应用[J].中国现代药物应用，2 0 0 9，3（5）：9 9.

[2] Blondeau JM.A review of the comparative in vitro activities of 1 2antimicrobial agents，with a focus on five new“respiratory quinolones”[J].J Antimicrob Chemother，1 9 9 9，4 3（Suppl B）：1.

[3] Kampougeris G，Autoniadou A，Kavouklis E，et al.Penetration of moxifloxacin into the human aqueous humour after oral administration[J].Br J Ophthalmol，2 0 0 5，8 9（5）：6 2 8.

[4] 胡永福，张燕梅，孙 莉.国内盐酸莫西沙星外用制剂研究概况[J].河北医药，2 0 0 9，3 1（1 2）：1 5 0 0.

[5] 徐亚静，胡容峰，尹 辉，等.加替沙星pH敏感眼用原位凝胶体外释放的研究[J].中国生化药物杂志，2 0 1 0，3 1（2）：1 0 7.

[6]Kim EY，Gao ZG，Park JS，et al.rhEGF/HP-β-CD complex in poloxamer gel for ophthalmic delivery[J].Int J Pharm，2 0 0 2，2 3 3（1-2）：1 5 9.

[7] 韦丽华，郭炎荣，韦 戈.左氧氟沙星液状眼用凝胶体外释药实验[J].广西医学，2 0 0 9，3 1（7）：1 0 3 0.

[8] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].2 0 1 0年版.北京：中国医药科技出版社，2 0 1 0：附录ⅩC.

Comparison of 3 Kinds of Methods for Drug Release Behavior of Moxifloxacin Hydrochloride Ophthalmic Gel in Vitro

YANG Hong-yan，XIA Jing-min，ZHANG Jian-huan，LIN San-qing
（School of Chemistry Science and Technology，Zhanjiang Normal University，Guangdong Zhanjiang 5 2 4 0 4 8，China）

OBJECTIVE：To screen the method for the determination of drug release behavior of Moxifloxacin hydrochloride ophthalmic gel（MHG）in vitro.METHODS：The content of moxifloxacin hydrochloride in artificial tears were determined by UV at 2 8 5nm，and the drug release behavior of MHG were studied and compared by the improved paddle method，bag filter method and diffusion chamber method.RESULTS：The in vitro release behavior of MHG followed Higuchi equation by 3methods（r＝0.9 9 97，0.9 8 15，0.9 9 12）.Accumulative release rates of MHG were 9 0%，8 0%and 3 0%within 1 4 0min by 3methods.The improved paddle method is more rapid and complete.CONCLUSION：Drug release behavior of MHG should be investigated by improved paddle method.

Moxifloxacin hydrochloride；Ophthalmic gel；Release in vitro；Paddle method；Bag filter method；Diffusion chamber method；Comparison

R9 2 7.1；R9 8 8.1

A

1 0 0 1-0 4 0 8（2 0 1 2）3 3-3 1 4 6-0 3

DOI1 0.6 0 3 9/j.issn.1 0 0 1-0 4 0 8.2 0 1 2.3 3.3 0

＊讲师，硕士。研究方向：新药开发与新剂型。E-mail：hongyan7 9 1 0@tom.com

2 0 1 1-0 9-1 3

2 0 1 1-1 0-2 6）

＊副主任药师。研究方向：药物分析。电话：0 9 5 4-2 0 4 0 3 7 6。E-mail：nglja@1 2 6.com