逄宇 李桂莲 王玉峰 宋媛媛 李强 欧喜超 董海燕 赵雁林

结核病是全世界范围内最主要的传染病之一［1］。半个世纪前，由于使用了抗结核药物，结核病疫情得到一定的控制［2］。然而，由于耐药结核病，特别是耐多药（multi-dr ug resistant，MDR）结核病的出现影响了结核病的有效治疗和控制［3］。因此，理解Mtb耐药机制对于解决上述问题具有重要意义。目前已经有大量研究揭示了Mt b的分子生物学和遗传学的耐药机制，包括利福平（r poB）、异烟肼（kat G、inh A 等）、链 霉 素 （rsp L、rrs 等）、喹 诺 酮（gyr A 和gyr B）等［4］。

RFP是目前最主要的一线抗结核药物，同时也是组成有效治疗方案并决定治疗效果的关键因素，文献表明对RFP耐药的菌株中大多数也对INH耐药［5］，因此研究Mtb对RFP的耐药机制对结核病，尤其是是耐RFP和MDR患者的治疗有着重要意义。RFP通过与Mtb RNA聚合酶的β亚基（由r poB编码）相结合从而抑制RNA的合成。文献报道表明约有90%以上的RFP耐药性是由于r poB基因的81-bp（编码密码子507-533位）的RFP耐药决定区（rifampicin resistance deter mining region，RRDR）的突变引起［6］。但是携带RRDR区不同位点突变的菌株最低抑菌浓度（mini mu m inhibitor y concentration，MIC）存在较大差别。本研究通过选取单耐RFP菌株探究不同r poB的突变类型与MIC的关系，同时在单耐药菌株中确定与RFP耐药有关的药物外排泵基因。

材料和方法

一、菌株和培养条件

本研究菌株来自2007—2008年全国结核病耐药基线调查［1］，总计约4000株菌株中分离获得单耐RFP菌株23株。所有分离株存放于10%甘油的苏通培养基，并置于-70℃冰箱中。在进行药敏实验前将冻存菌株在改良中性罗氏培养基上复苏4周。

二、罗氏培养基比例法药物敏感度实验和菌种鉴定

罗氏培养基比例法药物敏感度实验和分枝杆菌菌种鉴定参照文献［1］进行。……