周一军，李瑷，宋雨凌，李妍，周慧

（中国医科大学附属第四医院内分泌科，沈阳 1 1 0 0 3 2）

2型糖尿病患者由于肥胖、脂代谢紊乱常存在血浆游离脂肪酸（free fatty acid，FFA）水平增高［1］，长期的FFA水平升高可导致胰岛素分泌障碍，是形成胰岛素抵抗、胰岛β细胞功能减退的重要环节［2］。研究显示，GTP结合蛋白耦联受体40（GTP-binding protein coupling receptor 40，GPR40）是中长链 FFA的特异性受体，主要在胰岛β细胞和胰岛素分泌细胞系大量表达，介导了FFA对β细胞的多种作用。GPR40是1个7次跨膜受体，它是G蛋白耦联受体家族成员之一。GPR40以前从1个人类基因组片段中发现，曾被认为是1种“孤儿”受体（1种未知配体的受体），不发挥生理功能。最近研究发现，GPR40通过介导β细胞Ca2+信号反应参与了FFA刺激的胰岛素分泌。FFA作为胞外配体，通过激活胰岛β细胞的GPR40增加葡萄糖刺激的胰岛素分泌［3~5］。

长期暴露在高水平FFA下，胰岛细胞长期大量分泌胰岛素而出现功能障碍，引起“脂毒性”作用，去除胰岛β细胞中的GPR40可以保护大鼠不患肥胖诱发的糖尿病。因此，如果能选择性地抑制胰岛β细胞膜上的GPR40受体表达，抑制其信号转导功能，则可以防止“脂毒性”作用的发生，进而大大降低糖尿病发生的可能性。本研究拟应用反义RNA技术特异性下调胰岛β细胞GPR40的表达，观察其对胰岛 β 细胞内 Ca2+浓度（［Ca2+］i）及胰岛素分泌的影响。

1 材料与方法

1.1 试剂及仪器

成年SD大鼠，8~10周龄，体质量250~300 g，由中国医科大学实验动物中心提供。GPR40反义RNA真核表达载体 pcDNA3.1（＋）-GPR40（－）质粒由美国UniversityofTennesseeZhao博士惠赠；LipofectamineTM2000脂质体转染试剂，荧光染料探针Fura-2/AM购自Invitrogene公司；胶原酶Ⅴ、软脂酸、油酸均为美国Sigma公司产品；……