陈传萍，何群，王邵成，潘忠诚，王天骄，张玉魁，钟连声，赵雨杰

（中国医科大学生物芯片中心，卫生部细胞生物学重点实验室，沈阳 1 1 0 0 0 1）

CD15是细胞表面糖蛋白或糖脂含有的外链岩藻糖化的乙酰乳糖胺糖链，作为细胞黏附分子成员，与肿瘤的发生发展密切相关［1~4］。CD15s是CD15的唾液酸化形式，通过结合含有选凝素的血小板、粒细胞及内皮细胞促进癌灶细胞转移［5］。ST3GaL糖基转移酶在催化CD15s的生物合成中起重要作用［6］。肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）是具有广泛生物学活性的细胞因子［7］，对肿瘤细胞有多向调节和直接细胞毒作用［8］。肝癌患者血清TNF-α水平随病情进展明显上升，随肝病的有效治疗其水平逐渐下降。肿瘤微环境中低剂量的TNF-α可促进肿瘤细胞的侵袭和转移［9，10］。提示TNF-α在肝癌的发生发展及侵袭转移中起重要作用。研究表明，TNF-α能诱导多种肿瘤中CD分子含量的变化，从而影响细胞生物学功能［11］。本研究拟探讨TNF-α对肝癌细胞系CD15、CD15s、ST3GaL糖基转移酶家族蛋白含量以及细胞侵袭力的影响，阐明TNF-α影响细胞侵袭转移的可能机制。

1 材料与方法

1.1 材料

人原发性肝癌细胞系HepG-2，人高转移肝癌细胞系SMMC-7721购自南京KeyGEN公司；CD15、CD15s鼠抗人单克隆抗体，Matrix基质胶购自美国BD公司；糖基转移酶ST3GaL家族：ST3GaL-Ⅰ、ST3GaL-Ⅱ、ST3GaL-Ⅲ、ST3GaL-Ⅳ、ST3GaL-Ⅴ、ST3GaL-Ⅵ兔抗人多克隆抗体购自美国Abcam公司；蛋白内参β-Actin一抗购自Santa Cruz公司；羊抗兔IgG-HRP、羊抗鼠IgG-HRP、羊抗鼠IgM-HRP购自博士德公司；凯基全蛋白提取试剂盒、BCA蛋白定量检测试剂盒购自碧云天公司；蛋白彩虹Marker购自Fermentas公司；ECL发光反应试剂盒购自Thermo公司；人重组TNF-α购自美国Promega公司；Transwell购自Millipore公司（24孔，8 μm孔径）；……