姚 敏 陈 剑 王文娟 张晓玲 杨筱曦 周 清 徐锦堂

角膜是眼主要的屈光介质，角膜病，尤其是位于中央角膜的病灶，严重影响视力。角膜上皮作为角膜的第一道屏障，易受外伤、炎症的损伤，一旦遭受角膜缘、大面积或累及上皮基底细胞的损伤，上皮难以再生修复保持完整，角膜将失去透明性。

角膜移植术是目前角膜盲最为有效的治疗手段，但因供体的匮乏及免疫排斥反应，研究寻找有效的替代物显得尤为迫切。组织工程领域已有大量研究表明:人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells，hAEC)具有胚胎干细胞特性，拥有多能分化潜能，且具有免疫赦免性，是未来组织工程领域理想的种子细胞[1-3]。本实验旨在探索利用人永生化角膜上皮细胞(immortalized human corneal epithelial cells，ihCEC)培养液模拟角膜上皮细胞微环境，诱导hAEC分化为角膜上皮样细胞的可行性。

1 材料与方法

1.1 实验材料 HIV、甲肝、乙肝、衣原体、梅毒等血清学检查均为阴性，(37±1)周妊娠产妇剖宫产羊膜，取自暨南大学附属第一医院。产妇知情同意，本实验经医院医学伦理委员会批准同意。ihCEC株由中山大学眼科中心王智崇教授馈赠。

1.2 主要试剂和仪器 DMEM干粉(Gibco公司，美国)，胎牛血清(FBS，杭州四季青公司)，胶原酶Ⅱ、Dnase(Sigma公司，美国)，胰蛋白酶干粉(Hyclone公司，美国)，乙二胺四乙酸二钠(EDTA;Sigma公司，美国)，羊抗人 CK12(Santa Cruz公司，美国)，驴抗羊IgG二抗异硫氰酸荧光素标记(FITC，康为世纪)，CCK8试剂盒(Dojindo公司，日本)，丝裂霉素(浙江海正药业);倒置相差显微镜、荧光显微镜(Leica公司，德国)，FAC-SCalibur流式细胞仪(Becton Dickinson公司，美国)，酶标仪(Safire2公司，瑞士)。

1.3 方法

1.3.1 hAEC的提取、原代……