隋燕丽 周君君 刘 岭 张 宁

（山东达因海洋生物制药股份有限公司，山东 荣成 264300）

维生素A是人体维持正常的生理功能必需的微量元素之一[1]。维生素A在机体内的生理作用包括[2]：参与生长发育、提高免疫力、保持神经细胞正常功能、预防癌症、保护视力、保护上皮组织等。因此，维生素A缺乏可能导致疾病，视力下降，抗感染能力降低，呼吸道感染、消化道感染发病率升高。检测血清中维生素A的含量对于疾病的诊断和治疗很关键。选择有效的方法十分重要，高效液相色谱（HPLC）法是目前测定维生素常用方法之一[3]。本研究应用高效液相色谱（HPLC）法的建立一种快速提取和测定维生素AD滴剂中维生素A含量的方法具有重要意义。本研究应用高效液相色谱（HPLC）法测定维生素AD滴剂中维生素A含量，取得快速、简便的测定效果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 方法

1.1.1 仪器、药品及试剂

高效液相色谱仪、紫外检测器（美国Waters公司）；离心机（美国惠普公司）；旋涡器（南京仪器厂）；维生素A标准品（美国Sigma公司）；乙醇（分析纯）；甲醇（色谱纯）；正己烷（分析纯）；高纯氮气。实验用水为双蒸水。

1.1.2 预处理

SPE柱用500μL甲醇和500μL蒸馏水滤过，加入样品，用3mL蒸馏水和3mL甲醇-水（6∶4）洗柱子，用甲醇和氯仿收集洗脱的维生素A。

1.2.3 色谱条件

分析柱:Kromasil 100-5C18（150mm×43mm，5μm）色谱柱；柱温：30℃。检测波长270nm；流动相：甲醇∶酒精（80∶20）；流速0.5mL/min；进样量20μL。

1.2.4 校准曲线制备

用乙醇稀释维生素A的贮备液，溶液0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL，置于10mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。加入刚配置的溶液10μL，均匀混合3min，用高效液相色谱仪测定。得到回归方程：A=776.02C+13.25（r=0.9996）。线性范围为1.20～2.83mg/mL。

表1 分析维生素A回收率

2 结 果

2.1 回收率测定

按照处方工艺，加入处方量维生素A、D，配制维生素AD滴剂，记录色谱，计算回收率，见表1。

2.2 精密度和稳定性试验

选取维生素A样品行精密度试验，经校准曲线算实际浓度，维生素A 0.1835%。取同一样品，于最初、2h、4h、6h进样测定。维生素A 0.0768%，样品在6h内稳定。

2.3 维生素AD滴剂中维生素A含量测定

取样品10μL，注入液相色谱分析仪，计算含量维生素A含量为（0.3974±0.04）mg/mL。

3 讨 论

维生素A是人体正常生命活动不可缺少的微量元素。它在体内的作用靶点十分广泛，对于神经系统、呼吸系统、消化系统、生殖系统、免疫系统等均发挥效应[4]。维生素A又名视黄醇，是维持正常视力，防止夜盲症不可缺少的，还可以保证骨骼的生长发育、维持上皮细胞的结构、改善糖蛋白合成、促进铁吸收和转运、提高免疫力、防治癌症等[5]。临床维生素A缺乏会导致一系列疾病[6]，延缓伤口愈合、导致色素沉着、瘢痕形成，易患呼吸道感染、中耳炎、腹泻等。有研究表明[7]，维生素A还可以降低胆固醇，预防动脉粥样硬化发生发展。测定维生素A含量对于临床辅助诊断、鉴别诊断和治疗的意义重大。本研究高效液相色谱法测定维生素A的含量。高效液相色谱的是用微量加样器将提纯过的样品注入加样系统，启动高压泵，将流动相带入色谱柱，样品在色谱柱的流动相与固定相之间通过数次的交换，并按物质所带的电荷数目、分子极性的大小以及在固定相和流动相的分配系数等进行分离，检测后，根椐峰面积计算含量。该方法测试过程简单，且有灵敏度高，分析速度快，重复性和稳定性良好，精确度高等优点。结合本研究结果也显示，采用高效液相色谱法可去除辅料的干扰，更加有效的测定维生素AD滴剂中维生素A的含量。操作整个过程应该严格避光，由于维生素A的见光分解易、被氧化特性，在提取、处理样品和测定过程都要注意避光[8]。本研究流动相选用甲醇，维生素AD滴剂中维生素都能达到短时间基线分离。柱温对分离效果有比较小的影响，柱温的增加，缩短保留时间，改善峰的扩散。处理后，样本稳定，结果的重现性满意。有研究测定维生素A，采用正己烷提取蒸干法处理样本，但该方法操作繁琐。本研究缩短了分析时间，方法省时、省力，简便易操作。并且蒸发、溶解等步骤可导致维生素A损失，本研究方法所的结果更准确，能反映维生素A的真实含量。综上所述，高效液相色谱法测定维生素A的方法操作快速、简便、准确，且成本低，适宜常规开展，值得推广应用。

[1]孙明,鹿尘,张正尧.高效液相色谱法测定血清中维生素A的含量[J].河南预防医学杂志,2010,2(5):328-329.

[2]张银花,冯新昌.景泰县妇女血清维生素A、E含量测定[J].甘肃科技,2011,6(17):182-183.

[3]阳利龙,银雪花,祝文兵,等.HPLC测定血清中25-羟基维生素D_3和维生素A及应用[J].儿科药学杂志,2010,5(3):41-43.

[4]郑凤家,别明江,孙成均.DLPME-HPLC同时测定微量人血清中的维生素A和E[J].现代预防医学,2011,4(8):1522-1524.

[5]刁娟娟,田兰,孙炜,等.高效液相色谱法测定人血清中维生素A、E、C的含量[J].化学通报,2010,11(9):826-831.

[6]刁娟娟,田兰,孟磊,等.高效液相色谱法测定人血清中维生素A、E、C的含量[A].全国生物医药色谱学术交流会(2010景德镇)论文集[C].景德镇,2010:161.

[7]苏佳妍,岳青阳,于大海,等.维生素A含量测定方法的研究[J].山西医药杂志,2010,9(6):557-558.

[8]颜景超,任国谱,安静,等.高效液相色谱法测定乳制品中维生素A的研究进展[J].中国乳品工业,2011,3(9):43-46.