蔡笃雄 陈卫昌 曾仕平 汤净

罗格列酮对急性坏死性胰腺炎及其肺损伤保护作用的实验研究

蔡笃雄 陈卫昌 曾仕平 汤净

重症急性胰腺炎(series acute pancreatitis,SAP)是临床上常见的危重疾病，病情进展迅速，病死率高。因此，早期对SAP发病机制中的相关因素进行干预可能成为治疗SAP的重要措施。

本研究应用过氧化物酶增殖物活化受体γ(peroxisome proliferator-activated receptors,PPARγ)激动剂罗格列酮干预急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠，探讨罗格列酮对ANP及其肺损伤的保护作用。

一、材料与方法

1．实验动物及分组：健康SD大鼠72只，体重200～250 g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司(SCXK湘2009-0004)。按完全随机法分为ANP组、罗格列酮组(干预组)及假手术组，每组24只。采用胰胆管逆行注入5%牛磺胆酸钠0.1 ml/100 g体重(Sigma公司)方法建立ANP模型，罗格列酮组于制模前30 min腹腔内注射罗格列酮10 mg/kg体重(天津葛兰素史克公司)。假手术组开腹后仅翻动胰腺即关腹。分别于术后3、6、12 h腹主动脉抽血后处死大鼠，留取胰腺及肺组织。

2．血淀粉酶、TNF-α、IL-6、氧分压(PaO2)检测：血浆淀粉酶采用全自动生化分析仪检测；PaO2采用血气分析仪检测；血浆TNF-α、IL-6采用ELISA法检测，试剂盒购自北京晶美生物工程公司，按说明书操作。

3．胰腺及肺组织病理检查：按常规操作。

4．胰腺组织PPARγ mRNA和热休克蛋白70(HSP-70)mRNA及肺组织TNF-α、黏附分子1(ICAM-1) mRNA表达检测：采用RT-PCR法。PPARγ正义5′-TGACCACTCCCATTCCTTTG-3′，反义5′-TTTCCTGTCAAGATCGCCCT-3′，产物335 bp；HSP-70正义5′-GCTGACCAAGATGAAGGAGATC-3′，反义5′-GAGTCG-ATCTCCAGGCTGGC-3′，产物645 bp；TNF-α正义 5′-CTCAAAGACAACCAACTGGTGGTAC-3′，反义 5′-ACAGAGCAATGACTCCAAAGTAGACC-3′，产物312 bp；ICAM-1正义5′-ACCACAGCTGACAGGGAAATCG-3′，反义5′-AGAGGTCTTTACGCATGTCAACG-3′，产物282 bp。以β-actin(221 bp)为内参。引物由上海生工生物工程公司合成。反应条件： 94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s或1 min，50℃(PPARγ)或55℃(ICAM-1)或58℃(HSP-70)或60℃(TNF-α) 1 min，72℃ 1 min，30个循环，最后72℃7 min，4℃放置。产物电泳分离后扫描，以目的条带与β-actin的灰度比值表示mRNA的相对表达量。……