梁学政，唐勇琛，吕建伟，陈惠红，陆玉婷

(1.广西壮族自治区柳州市中医院，广西 柳州 545001;2.广西中医学院研究生学院2008级研究生，广西 南宁 530001)

弱视明口服液是广西柳州市中医院通过临床实践研制出的纯中药制剂，由熟地黄、黄精、枸杞子、陈皮、石菖蒲等6味中药组方，具有益肾填精、养肝明目、开窍宁神之功效，用于儿童神经发育不良、近视、远视、散光等造成的弱视。现代药理学研究证明，熟地黄多糖具有滋阴、益智、增强人体造血机能、调节免疫等作用[1]，黄精多糖可调节血糖、提高人体免疫功能、抗疲劳等[2]，枸杞子多糖可提高人体免疫功能、降糖调脂、抗疲劳、抗衰老、保肝等[3]，因此，多糖为该制剂的主要有效成分之一。笔者采用苯酚-硫酸法[4-8]对弱视明口服液中的总多糖进行含量测定，为更深入地研究弱视明口服液提供依据。

1 仪器与试药

UV-1601型紫外-可见分光光度计(日本岛津公司);电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司);CQX25-6型超声波清洗机(中国北京创新德超声电子研究所);KR80-2型沉淀离心机(上海分析仪器厂)。D-无水葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110833-200904);弱视明口服液(柳州市中医院药剂科自制，批号为 20110513，20110514，20110515);苯酚、浓硫酸等其他试剂均为分析纯，水为纯净水。

2 方法和结果

2.1 溶液制备

取苯酚100 g，加铝片0.1 g、碳酸氢钠0.05 g混合，常压蒸馏，收集182℃馏分，称取该馏分5.0 g，置100 mL容量瓶中，加新鲜蒸馏水稀释至刻度，摇匀后置棕色试剂瓶中，即得5%苯酚溶液，冷藏，避光保存。精密称取经105℃干燥至恒重的 D-无水葡萄糖对照品40.4 mg，置100 mL量瓶中，加纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为0.404 g/L的葡萄糖对照品溶液。精密吸取弱视明口服液1 mL，加水稀释至50 mL，从中另取2 mL蒸干，80%乙醇洗涤，离心(3 000 r/min)10 min，倾去上清液，用80%乙醇洗涤两次，再用水溶解沉淀，合并残留在蒸发皿上的沉淀一并过滤，收集滤液后，稀释并定容至100 mL容量瓶中，即得供试品溶液。

2.2 检测波长确定

分别吸取一定量的葡萄糖对照品溶液，显色后在280～600 nm波长范围内扫描。结果葡萄糖对照品和供试品的最大吸收峰位一致，均在490 nm波长处有最大吸收。因此，本试验选用490 nm作为检测波长。

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密吸取葡萄糖对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL，分别置25 mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀。分别精密吸取以上溶液各2.0 mL，置具塞试管中，加5%苯酚溶液1.0 mL，摇匀，迅速沿壁加入浓硫酸5.0 mL混匀，40℃水浴加热20 min，置冷水浴中冷却至室温，在490 nm波长处测定吸光度(另用纯化水随行做空白试验)。以葡萄糖质量浓度(X)为横坐标、吸光度(A)为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 A=15.571X+0.026，r=0.999 8(n=6)。结果表明，葡萄糖质量浓度在0.008 08～0.048 48 g/L范围内与吸光度呈良好线性关系。

精密度试验:精密吸取同一葡萄糖对照品溶液2 mL，置25 mL试管中，依法重复测定5次。结果的 RSD=0.25%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液2 mL，置25 mL试管中，依法在120 min内重复测定9次，每隔15 min测定1次。结果平均吸光度为0.314 5，RSD=0.15%(n=9)，表明供试品溶液中总多糖在120 min内稳定性良好。

重复性试验:精密吸取同一批样品6份，依法制备供试品溶液并测定含量。结果的 RSD=0.60%(n=6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验:精密吸取6份已知含量的样品溶液(以葡萄糖计量为0.027 7 g/L)各1 mL，再准确加入1 mL已知质量浓度的 3 组葡萄糖对照品溶液(0.023 1，0.026 0，0.033 1 g/L)，混匀。取混匀液依法测定含量，计算加样回收率。结果见表1。

表1 总多糖加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

精密吸取3批样品1 mL，依法制备供试品溶液并测定，用外标法计算口服液中总多糖含量(以葡萄糖计)。结果见表2。

表2 样品含量测定结果(n=3)

3 讨论

目前，由于国内实验室条件的限制，苯酚-硫酸法被广泛应用于多糖的含量测定[4-8]。多糖在被浓硫酸水合时，产生的高温使其迅速水解成单糖，反应迅速完全，并能迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成有色化合物，在490 nm波长处有特征吸收，且形成颜色的深浅与其含量成正比。故可采用分光光度计测定其吸光度，然后通过葡萄糖标准曲线计算总多糖的含量。

另外，试验样品用80%乙醇处理，消除了亲脂性杂质、单糖、低糖和苷类成分的干扰，故可纯化多糖。

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