傅若秋，孟德胜，卢来春，余孟君，欧阳冰，鞠 桦

(1.中国人民解放军第三军医大学第三附属医院，重庆 400042; 2.安微蚌埠医学院药学系，安徽 蚌埠 233030)

薇依霜为医院传统护肤制剂，具有防止皮肤萎缩、保湿防皱、营养皮肤、抗衰老等作用。其主要成分为维生素E(含量为2%)，且含有羟苯乙酯(含量为0.1%)作为防腐剂。为对其进行质量控制，笔者参照有关文献方法[1-2]，采用高效液相色谱(HPLC)法测定了维生素E和羟苯乙酯的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Gold System高效液相色谱仪(美国贝克曼)，包括125泵、166紫外检测器;Sartorius BT 25S型电子分析天平(德国赛多利斯);RE-201C型恒温水浴锅(巩义市予华仪器有限责任公司);KQ-50B型超声波清洗仪(昆明市超声仪器有限公司)。维生素E对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100062-200608);羟苯乙酯对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100847-200501);薇依霜(第三军医大学第三附属医院自制，批号分别为091112，091217，091123);甲醇(色谱纯，SK Chemicals公司);水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

维生素E测定色谱条件:Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流动相:甲醇;紫外检测波长:285 nm;流速:2.0 mL/min;进样量:20μL;柱温:室温。羟苯乙酯测定色谱条件:Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5μm);流动相:甲醇 -水(45∶55);紫外检测波长:258 nm;流速1.0 mL/min;进样量:20μL;柱温:室温。

2.2 溶液配制

精密称取维生素E对照品0.024 9 g，置25 mL容量瓶中，加无水乙醇溶解定容，得质量浓度为0.996 g/L的维生素E对照品溶液。精密称取羟苯乙酯对照品0.010 8 g，置50 mL容量瓶中，加无水乙醇溶解定容，作为对照品贮备液;精密吸取对照品贮备液5 mL，置50 mL容量瓶中，加无水乙醇定容，得质量浓度为21.6μg/mL的羟苯乙酯对照品溶液。精密称取薇依霜0.1 g，置10 mL量瓶中，加适量无水乙醇溶解，超声处理1 h，冷却至室温，定容，摇匀，微孔滤器(0.22μm)滤过，续滤液作为供试品溶液。测定维生素E时，供试品溶液不用稀释;测定羟苯乙酯时，供试品溶液需用无水乙醇稀释2倍。按处方比例配制缺维生素E的制剂，再按供试品溶液制备方法制成不含维生素E的阴性对照品溶液。按处方比例配制缺羟苯乙酯的制剂，再按供试品溶液制备方法制成不含羟苯乙酯的阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性考察:分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液，按2.1项下色谱条件进样，记录色谱图。结果见图1、图2。可见，待测成分与其他物质分离良好，分离度大于1.5，维生素E和羟苯乙酯的保留时间分别为13.6 min和18.6 min，阴性对照品溶液色谱在待测成分相应位置无干扰峰，表明其他成分对待测成分的测定无干扰。

图1 维生素E高效液相色谱图

图2 羟苯乙酯高效液相色谱图

线性关系考察:分别精密吸取维生素E对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置 10 mL 容量瓶中，加无水乙醇定容，配制得5个不同梯度的对照品工作溶液(0.099 6，0.199，0.299，0.398，0.498 g/L)，按2.1项下色谱条件分别进样，记录维生素E峰面积，以峰面积(A)对质量浓度(C，g/L)进行线性回归，得回归方程 A=32.241 8 C+0.166 9，r=0.999 5(n=5)。结果表明，维生素E进样质量浓度在0.099 6～0.498 g/L范围内与峰面积线性关系良好。分别精密吸取羟苯乙酯对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置 10 mL 容量瓶中，加无水乙醇定容，配制得5个不同梯度的对照品工作溶液(2.16，4.32，6.48，8.64，10.80μg/mL)，按2.1项下色谱条件分别进样，记录羟苯乙酯的峰面积，以峰面积(A)对质量浓度(C，μg/mL)进行线性回归，得回归方程 A=2.122 2C+0.01031，r=0.9997(n=5)。结果表明，羟苯乙酯进样质量浓度在2.16～10.80μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取维生素E高(0.398 g/L)、中(0.299 g/L)、低(0.199 g/L)3个质量浓度的对照品溶液，按2.1项下色谱条件于1 d内连续进样5次，以及连续5 d分别进样，考察日内精密度和日间精密度。结果日内精密度 RSD＜1.18%(n=5)，日间精密度 RSD＜1.72%(n=5)。取羟苯乙酯高(8.64μg/mL)、中(6.48μg/mL)、低(4.32μg/mL)3个质量浓度的对照品溶液，按2.1项下色谱条件于1 d内连续进样5次，以及连续5 d分别进样，考察日内精密度和日间精密度。结果日内精密度RSD＜1.57%(n=5)，日间精密度 RSD＜2.45%(n=5)。

稳定性试验:取同一供试品溶液，室温放置 0，6，12，24 h，依法进样测定峰面积。结果维生素E峰面积的 RSD=1.67%，羟苯乙酯峰面积的 RSD=1.23%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验:取同一批样品(批号为091112)5份，依法制备供试品溶液并进样，记录峰面积。结果维生素E峰面积的 RSD=1.91%(n=5)，羟苯乙酯峰面积的 RSD=1.57%(n=5)。

加样回收试验:精密称取已知维生素E含量的同一批样品1 g(批号为091112)共9份，每3份为一组，分别加入不同质量浓度维生素E对照品溶液1.0 mL，按2.2项下方法制备供试品溶液并进样，计算加样回收率。精密称取已知羟苯乙酯含量的同一批样品0.03 g(批号为091112)共9份，每3份为一组，分别加入不同质量浓度羟苯乙酯对照品溶液各1.0 mL，按2.2项下方法制备供试液品溶液并进样，计算加样回收率。结果见表1。

表1 维生素E与羟苯乙酯加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取薇依霜样品3批，按2.2项下制备供试液品溶液，按2.1项下的色谱条件进样测定，计算维生素E和羟苯乙酯的含量。结果维生素E和羟苯乙酯含量分别为标示量的(99.9±0.72)%和(98.84±2.87)%(n=3)。

3 讨论

曾考察了乙腈-甲醇对维生素E的分离效果，发现维生素E的保留时间随乙腈含量的增加而延长，当乙腈为100%、流速为1.5 mL/min时，保留时间达43.5 min。而用甲醇作流动相、流速为1.5 mL/min时，保留时间为18.5 min，当流速增加到2.0 mL/min时，保留时间降到13.6 min，且峰形较好。因此本试验选择甲醇为流动相，并将流速设为2.0 mL/min。

羟苯乙酯测定时，考察了不同比例甲醇-水作为流动相时的分离效果，当甲醇-水为50∶50时，羟苯乙酯与样品中的干扰物质(主要为香精)的色谱峰重叠，无法分离;当甲醇-水为45∶55、流速为 1.0 mL/min时，可以较好分离，保留时间为18.6 min。

曾采用乙醇为溶剂、80℃水浴溶解、冷藏后离心取上清液的方法，但试验中发现样品分散溶解不完全，且离心分离效果不好，上清液中不溶性杂质不易去除，容易堵塞色谱柱。后改为超声促溶并用微孔滤膜过滤的方式处理样品，通过加样回收试验证明该方法稳定、可靠。

[1]胡守莲，范玉峰.HPLC法测定维生素E搽剂中维生素E的含量[J].中国当代医药，2009，16(10):5-6.

[2]简炎林，邹国芳.医院制剂中防腐剂羟苯乙酯的含量测定[J].中国药房，2009，20(13):1 016-1 017.