林娜 陈津 付云烽 施小华 王庆华 谭建明

间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）是具有自我更新和多向分化潜能的非造血干细胞。近年来，干细胞广泛应用于心血管疾病、神经系统疾病、糖尿病和创伤等各种疾病的研究[1]。脐带来源广泛，取材方便，易于采集保存。脐带采集对于新生儿及产妇均无任何痛苦和不良作用，脐带来源的间充质干细胞（umbilical cord derived mesenchymal stem cells, UC-MSCs）已成为近年研究的新热点。在UC-MSCs细胞培养过程中，通过对同一根脐带分离出的脐带间充质干细胞，在不同开关箱次数情况下，P3代培养3 d，脐带间充质细胞形态观察和数量统计，相同细胞的生长速度和质量存在差异。本文主要探讨大规模培养MSCs 过程中频繁开关培养箱造成温度和CO2浓度的变化对细胞生长情况的影响，报道如下。

材料和方法

一、脐带来源

脐带取自福州总医院2009年9月至2010年9月健康足月产新生儿，病原学检查阴性，经产妇知情同意后无菌留取。

二、仪器试剂

CO2温培养箱 （日本，SANYO公司），LGDMEM培养基 (美国，Hyclone公司)，胎牛血清FBS(美国，Hyclone公司)，75 cm2培养瓶 （美国，Costar公司），0.25﹪胰酶(美国，Gibco公司)。

三、UC-MSCs 的分离与培养

取新鲜足月产新生儿脐带，磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline，PBS)冲洗，剔除动静脉，分离出沃顿胶，0.1﹪Ⅳ胶原酶消化过夜，0.25﹪胰酶消化60 min，离心洗涤，用含10﹪胎牛血清的LG-DMEM培养基接种，培养72 h换液，以后每3 d换液1次，长到80﹪融合时，用0.25﹪胰酶消化、传代。镜下观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞表面抗原。

四、开关箱实验

取 P3代细胞，以 2×105/75 cm2的密度接种，分成7组，每组6瓶细胞，置于7个37℃、5﹪ CO2的培养箱中培养，对照组培养过程中不开关培养箱，其它6组分别模拟培养操作中不同的开关培养箱次数（每天5次、10次），以及每次不同的开箱时间（1、2和3 min）。……